生物化学基因重组和基因工程临本.ppt

生物化学基因重组和基因工程临本; 掌握：基因重组和基因工程的概念，细菌基因转移的接合作用、转化作用和转导作用，DNA克隆、限制性核酸内切酶、基因载体、cDNA文库、基因组DNA文库的概念，目的基因的来源，基因载体的类型，重组DNA技术的操作程序。 熟悉：同源重组、特异位点的基因重组、转座重组的概念和基本过程，重组DNA技术的操作步骤。 了解：重组DNA技术与医学的关系。 ;基因重组 (gene recombination) 是指DNA片段在细胞内、细胞间，甚至在不同物种之间进行交换，交换后的片段仍然具有复制和表达的功能。 基因工程 (genetic engineering） 是指采用人工方法将不同来源的DNA进行重组，并将重组后的DNA引入宿主细胞中进行增殖和表达的过程。 ;第一节自然界DNA重组和基因转移是经常发生的 DNA Recombination and Gene Transfer Occur Frequently in Nature; DNA重组;发生在同源序列间的重组称为同源重组(homologous recombination)，又称基本重组（general recombination）。通过链的断裂和再连接，在两个DNA分子同源序列间进行单链或双链片段的交换。;Holliday模型的4个关键步骤： ;片段重组体 （见模型图右边产物）： 切开的链与原来断裂的是同一条链，重组体中间含有一段异源双链区，其两侧来自同一亲本DNA。; 内切酶 (recBCD);Holiday中间体;Holliday intermediate的电镜照片;二、细菌的基因转移与重组;可接合质粒如 F 因子(F factor) ;（二）转化作用;（三）转导作用;λ噬菌体的生活史;;λ噬菌体的整合酶识别噬菌体和宿主染色体的特异靶位点发生选择性整合；反转录病毒整合酶可特异地识别、整合反转录病毒cDNA的长末端重复序列(long terminal repeat, LTR)。 ;;（二）细菌的特异位点重组;沙门菌H片段倒位决定鞭毛相转变;（三）免疫球蛋白基因的重排;重链(IgH)基因的V-D-J重排和轻链(IgL)基因的V-J重排均发生在特异位点上。在V片段的下游，J片段的上游以及D片段的两侧均存在保守的重组信号序列(recombination signal sequence, RSS)。此重排的重组酶基因rag (recombination activating gene)共有两个，分别产生蛋白质RAG1和RAG2。 ;;四、转座重组; 插入序列(insertion sequences, IS)组成：;插入序列发生转座的形式：;插入序列的复制性转座;转座子(transposons) ——从一个染色体位点转移到另一位点的分散重复序列。; 细菌的可流动性元件 A插入序列：转座酶编码基因两侧连接反向末端重复序列(箭头所示) B转座子Tn3：含有转座酶、β-内酰胺酶及阻遏蛋白编码基因 C转座子Tn10：含四环素抗性基因及两个相同的插入序列IS10L;由转座子介导的转座;DNA Recombination Technique is also Called DNA Cloning or Molecular Clone ;重组DNA技术的发展史;;;水母;利用乳腺生产药用蛋白的转基因羊;;转基因抗冻西红柿transgenic anti-chilling tomatoes;延熟保鲜的转基因番茄转基因（transgenic anti-ageing tomatoes）;转抗虫基因Bt烟草植株的抗虫效果;Golden rice（黄金米）;基因工程与药物研制;　　胰岛素从猪、牛等动物的胰腺中提取，100Kg胰腺只能提取4-5g的胰岛素，其产量之低和价格之高可想而知。;环境保护　　 基因工程做成的“超级细菌”能吞食和分解多种污染环境的物质。;　　利用基因工程培育的“指示生物”能十分灵敏地反映环境污染的情况，却不易因环境污染而大量死亡，甚至还可以吸收和转化污染物。;;一、重组DNA技术相关概念;应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质（同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA）与载体DNA接合成一具有自我复制能力的DNA分子——复制子(replicon)，继而通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增提取获得大量同一DNA分子，也称基因克隆或重组DNA (recombinant DNA) 。 ; 目的： ① 分离获得某一感兴趣的基因或D