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第二十九章免疫化学法测定生物化学物质教学目标与要求掌握 激素、载脂蛋白及脂蛋白（a）、糖尿病相关激素及抗体等临床常用项目，免疫化学法测定的原理以及其方法的优缺点。熟悉 肿瘤标志物、治疗药物等其他项目测定的方法原理与评价。了解 免疫化学法测定生物化学物质的方法概述与进展。 简介免疫化学技术（immunochemical system,ICS）免疫化学技术：利用已知的抗原或抗体，检测相应的抗体或抗原。特点：高度特异性和高灵敏性。广泛应用于激素、蛋白质或多肽、肿瘤标志物、神经递质、核酸、心肌损害标志物等生化物质的测定。发光免疫法(luminescent immunoassay)免疫学反应和发光技术相结合的产物，可以自动化检测微量的抗原或特异性抗体。类型：光致发光、酶促化学发光、电化学发光等。荧光免疫法将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出，从而可对抗原进行细胞定位。 测定项目：抗着丝点抗体、抗组蛋白抗体 等。放射免疫测定技术（radioimmunoassay,RIA）以放射性核素作为示踪物的一种免疫标记技术。特点：高灵敏度、特异性强、重复性好应用：适用于各种抗原和抗体、微量蛋白质、激素、核苷酸、多肽等的定量测定。放射免疫分析免疫放射分析酶免疫测定技术以酶标记的抗原或抗体作为主要试剂的免疫测定方法，在抗原抗体的特异性反应后，通过标记酶对底物的酶解呈色，根据呈色的深浅可以对相应抗体或抗原进行定性或定量的测定。酶放大免疫测定技术（enzyme multipled immunoassay technique,EMIT）酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbentassay,ELISA） 双抗体夹心法、双位点一步法、竞争法、捕获法等免疫比浊法利用抗原抗体复合物在液相中形成的浊度对入射光产生散射特性来测定抗原含量的一门技术。免疫散射比浊法免疫透射比浊法方法学评价抗原抗体反应特点（特异性 、比例性、可逆性 ）优点：方法特异性好，灵敏度高，可达ng或pg水平。缺点：带现象：Ag与Ab比例不适而不出现可见反应。* 前带(prozone) 抗体过量时。* 后代(postzone) 抗原过量时。第一节 糖尿病相关激素和自身抗体测定一、胰岛素（In）和C肽（cp）（一）测定方法1.放射免疫法：原理：InI125 +In + anti-In竞争结合 测定结合部分（B）放射性强度。方法评价： 特异性好、灵敏度高、试剂成本较低，但因受同位素半衰期影响，试剂盒寿命短，每次试验需同时作标准曲线，且自动化程度不高，有放射性污染，临床应用日趋减少。B、F分离2.发光酶免疫法测定In原理：In+ anti-In* +羊抗人In-ALP分离洗涤 +AMPPD光量子强度与In量成正比。*-磁珠方法评价:灵敏，可批量检测，自动化分析。ALP3.电化学发光免疫法测CP原理：（双抗体夹心） 三联吡啶钌-CP抗体 + CP+ 生物素化CP抗体 链霉亲和素包被的磁性微粒 吸附到电极 三丙胺（TPA） 电化学反应。 磁场电场二、胰岛自身抗体胰岛自身抗体主要有： 胰岛细胞抗体(islet cell antibody，ICA)， 谷氨酸脱羧酶抗体(glutamic acid decarboxylase autoantibody，GADA)， 胰岛素自身抗体( insulinautoantibody，IAA)等。方法：间接免疫荧光法、放免法、ELISA、免疫印迹法和 蛋白芯片法。（一）间接免疫荧光法测定ICA原理： 评价：阴阳性对照（二）放免法测定胰岛素自身抗体血清胰岛素水平可产生干扰。（三）ELISA测定胰岛素自身抗体免疫捕获法测定胰岛素抗体第二节 血清载脂蛋白一、载脂蛋白AⅠ和B （免疫透射比浊法测定ApoAI或ApoB ） 1. 测定原理特异性抗体与载脂蛋白的浊度反应多点校准，曲线拟合。（采用Logit-Log模式） 2. 性能：抗血清的纯度和效价抗原抗体比例合适性校准血清定值抗原位点的暴露主要干扰：血清本身的混浊（如高脂血症）可作标本空白管，或采用两点法除去空白。 二、LP(a) Lp(a)既有ApoB100又有特征性载脂蛋白Apo(a)，加之Apo(a)的分子量变异较大 故Lp(a)测定方法难度较大 。 免疫比浊法测定原理Lp(a)的单克隆抗体与Lp(a)产生浊度反应多点校准，曲线拟合测定方法评价灵敏度高，能自动化免疫检测法被临床广泛应用Apo(a)多态性，准确度不好，难以标准化 第三节 心肌蛋白和利钠肽测定一、肌红蛋白（乳胶增强免疫比浊法测定肌红蛋白）原理： 聚苯乙烯乳胶颗粒包被抗体，与肌红蛋白发