免疫学检验原理与临床应用.pptxVIP

免疫学检测原理及临床应用免疫学教研室PPT课件 免疫学检验是应用免疫学理论设计的一系列测定抗原、抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因子的实验手段及分子生物学技术，在疾病的诊断、疗效评价中应用广泛。PPT课件精品资料你怎么称呼老师？如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你是否会认为老师的教学方法需要改进？你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？教师的教鞭“不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我笨，没有学问无颜见爹娘 ……”“太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”第一节 免疫学检验原理细胞水平检测分子水平检测基因水平检测PPT课件一、免疫细胞的检测 对机体参与免疫应答细胞进行分离、纯化、鉴定、计数及功能测定。外周血单个核细胞的分离（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC) T细胞和B细胞的分离 DC、NK、Mφ的分离PPT课件密度梯度离心(Ficoll)离心　（泛影酸葡甲胺-聚蔗糖）PPT课件PPT课件利用细胞的吸附特性E花环沉降法 ：分离T细胞（CD2-绵羊红细胞）尼龙毛柱分离法 ：分离T或B细胞（B细胞尼龙毛的粘附力）。贴壁法：分离MφPPT课件利用细胞表面标志T细胞：CD3，CD4，CD8B细胞：CD79，CD19，CD5NK：CD56+、CDl6DC：CD11c，CD86Mφ：CD11b，CD86，CD83亲和版结合分离法PPT课件流式细胞术（Flow cytometry，FCM）采用激光作为激发光源；利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术；用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个参数信号进行数据处理分析。 PPT课件流式细胞仪工作原理Ag1细胞1细胞2Ag2PPT课件流式细胞仪常检测的细胞特性细胞组成细胞功能大小细胞表面/胞浆/核--特异性抗原密度细胞活性DNA, RNA含量胞内细胞因子蛋白质含量激素结合位点钙离子, PH值, 膜电位酶活性PPT课件流式细胞术技术分析PPT课件免疫磁珠分离immunomagnetic?beads磁珠抗体柱子磁铁PPT课件免疫磁珠分离的正选法和负选法PPT课件抗原肽-MHC四聚体分离技术抗原肽MHC I生物素亲和素荧光素非肽特异性CD8T肽特异性CD8Tanti-CD8CD4T及B肽-四聚体PPT课件淋巴细胞的功能检测 淋巴细胞功能测定可分为体内实验和体外实验。体内实验主要是间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应；体外实验主要包括淋巴细胞对抗原或有丝分裂原刺激后的增殖反应、细胞毒性试验及淋巴细胞分泌产物的测定 PPT课件T淋巴细胞增殖试验1. 原理：刺激物淋巴细胞DNA合成分化细胞变大细胞浆扩大母细胞空泡核仁明显PPT课件核染色质疏松淋巴细胞转化的刺激物非特异性刺激物： PHA ------T细胞 ConA -------T细胞 PWM -------T、 B细胞 LPS -------B细胞特异性刺激物： 异种抗原 同种组织抗原 PPT课件核仁2. 方法：形态学检查法细胞浆，增大，可见空泡；细胞核增大，偏一侧，核松散，可见核仁。PPT课件3H-TdR掺入法PPT课件T细胞杀伤功能测定细胞毒试验51Cr(铬)释放法 +CTLPPT课件MTT增殖实验 MTT实验MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。MTT比色法是一种检测细胞存活和生长的方法。原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比PPT课件MTT增殖实验结果细胞数吸光度PPT课件体内试验特异性抗原皮肤试验抗原：结核菌素（OT）植物血凝素（PHA）PPT课件二、B细胞功能检测B细胞增殖能力的试验溶血空斑试验B细胞抗体形成功能的检测体内试验PPT课件(一)B细胞增殖能力的试验 细菌脂多糖B细胞增殖形态学3H－TdR掺入法PPT课件(二) 溶血空斑试验1. 原理：绵羊红细胞脾脏绵羊红细胞PPT课件3．临床应用与评价溶血空斑试验主要用于测定药物和手术等因素对体液免疫功能的影响评价免疫治疗或免疫重建后机体产生抗体的能力。 PPT课件酶联免疫斑点Enzyme Linked ImmunoSPOTPPT课件1.ELISPOT技术起源与发展1983年, CzerkinskySedgwick ：计数分泌抗体的 B 细胞；1985年，More：NC板，改进显色底物，不再需要琼脂糖凝胶;1988年，Czer