新项目方法能力验证报告(水质 总大肠菌群和粪大肠菌群的测定 纸片快速法).pdf

XXXX 有限公司 新项目方法验证能力验证报告 水质 总大肠菌群和粪大肠菌群的测定 纸片快速法 项目名称： HJ 755-2015 负责人 ： 审核人 ： 日 期： 报告编号： 第 1 页 共 9 页 水质 总大肠菌群和粪大肠菌群的测定 纸片快速法 HJ 755-2015 方法验证能力验证报告 1、方法依据及适用范围 本报告依据：水质 总大肠菌群和粪大肠菌群的测定 纸片快速法 HJ 755-2015制定。 本标准适用于地表水、废水中总大肠菌群和粪大肠菌群的快速测定。 2、方法原理 按MPN法，将一定量的水样以无菌操作的方式接种到吸附有适量指示 剂（溴甲酚紫和2，3，5-氯化三苯基四氮唑即TTC）以及乳糖等营养成分 的无菌滤纸上，在特定的温度（37℃或44.5℃）培养24h，当细菌生长繁殖 时，产酸使pH值降低，溴甲酚紫指示剂由紫色变黄色，同时，产气过程相 应的脱氢酶在适宜的PH范围内，催化底物脱氢还原TTC形成红色的不溶 性三苯甲臜（TTF），即可在产酸后的黄色背景下显示出红色斑点（或红晕）。 通过上述指示剂的颜色变化就可对是否产酸产气作出判断，从而确定是否 有总大肠菌群或粪大肠菌群存在，再通过查MPN表就可得出相应总大肠菌 群或粪大肠菌群的浓度值。 3 、主要仪器、设备及试剂 4.1 培养基与试剂 除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯化学试剂。 4.1.1 市售水质总大肠菌群和粪大肠菌群测试纸片：10ml水样量纸片、 1ml水样量纸片。 按以下方法进行质量鉴定，达到要求后方可使用。 报告编号： 第 2 页 共 9 页 （1）外层铝箔包装袋应密封完好，内包装聚丙烯塑膜袋无破损。 （2 ）纸片外观应整洁无毛边，无损坏，呈均匀淡黄绿色，加去离子水 或蒸馏水后呈紫色，无论加水与否，应无杂色斑点，无明显变形，表面平 整。 （3 ）纸片加入相应水样，充分浸润、吸收后，将内包装聚丙烯塑膜袋 倒置，袋口应无水滴悬挂。 （4 ）纸片以去离子水或蒸馏水充分润湿后，其pH 值应在 7.0～7.4 范 围内。 （5 ）纸片和内包装聚丙烯塑膜袋应无菌，加入相应水量的无菌水， 37℃±1 培养24h 后，纸片应无微生物生长，其紫色保持不变，且无红斑出 现。 （6 ）进行总大肠菌群和粪大肠菌群阴性、阳性标准菌株检验，其特性 应符合要求。 4.1.2 无菌水 取适量实验用水，经 121 高压蒸汽灭菌 20 min，备用。 4.1.3 硫代硫酸钠（Na S O .5H O ）。 2 2 3 2 4.1.4 乙二胺四乙酸二钠（C H N O Na .2H O ）。 10 14 2 8 2 2 4.1.5 硫代硫酸钠溶液℃ρ （Na S O ）=0.10 g/ml 2 2 3 称取 15.7 g 硫代硫酸钠，溶于适量水中，定容至 100 ml，临用现配。 4.1.6 乙二胺四乙酸二钠溶液℃ρ （C H N O Na .2H O ）=0.15 g/ml 10 14 2 8 2 2 称取 15g 乙二胺四乙酸二钠，溶于适量水中，定容至 100 ml，此溶液 可保存 30 d 。 3.1仪器 报告编号： 第 3 页 共 9 页 3.2.1 恒温培养箱：37℃±1℃