蛋白质浓度的紫外测定.docVIP

可修改 欢迎下载 精品 Word 可修改 欢迎下载 精品 Word 可修改 欢迎下载 精品 Word 蛋白质浓度的紫外测定 1 实验目的 （1）了解蛋白中20个常见氨基酸的结构 （2）掌握紫外分光光度法测定蛋白质的原理及应用 2 实验原理 蛋白质分子中所含酪氨酸、色氨酸及苯丙氨酸的芳香环结构对紫外光有吸收作用。色氨酸的吸收最强，但由于一般蛋白质中酪氨酸的含量比色氨酸高许多，因此这一吸收可认为主要是由酪氨酸提供的。其最大值在280nm附近，不同的蛋白质吸收波长略有差别。在无其他干扰物质存在的条件下，280nm的吸光度即可作蛋白质的测定用，但不同种的蛋白质对280nm波长的光吸收强度因芳香性氨基酸残基含量的不同而有差异。1 mg/ml浓度的不同蛋白质的吸光度值在0.5~2.5之间，因此测定未知浓度蛋白需用同种蛋白质对照结果才可靠。 测量方法和计算公式： a) 对于不含核酸污染的蛋白溶液（如果样品光吸收值大于2.0，应将样品稀释至光吸收值小于2.0）：选择蛋白缓冲液作为空白对照，测定280 nm波长处的光吸收值，蛋白浓度与吸光度值成正比关系。 b) 对于存在核酸污染（A280/A2600.6）蛋白溶液：选择蛋白缓冲液作为空白对照，测定280 nm和260 nm波长处的光吸收值，或280 nm和205 nm波长处光吸收值，按照以下经验公式计算：