生物化学方法及其在中医研究中的应用.pptxVIP

第六章 第四节 生物化学方法及其 在中医研究中的应用 ;作者和所在科室介绍。 引言部分比较全面完整地介绍了生化的发展历程，及其灿烂的里程碑。仔细阅读，有利于我们更好地理解这门学科，及其技术。 生物化学是运用化学理论和技术来研究组成生物体的基本成分及其在生物体内所进行的化学变化规律的一门学科，从而揭示生命现象的化学本质。;生物化学的发展可以分为静态生化、动态生化和功能生化三个阶段，这三个阶段并不是截然分开的，它反映了人们对生命活动认识的深入过程?? 静态生化，主要指以分离、制备、纯化和检测某物质。 动态生化，主要指活体内的化学反应，及其动态平衡。 功能生化，主要指研究某化学物质分子结构与功能的关系（P169）。 从发扬中医学角度来说，掌握生物化学理论和技术，不仅能更深刻理解人体的生长、发育、壮盛、衰老等问题，而且从蛋白质、核酸的分子结构变化来探讨疾病的诊断、治疗和预防，无疑会起到如虎添翼的作用。 ;一、生物化学的主要方法 生物化学技术是研究生物内物质的化学组成、结构、功能以及在生命过程中化学物质代谢变化规律，调节控制等的实验方法。 常用的生物化学技术主要有物质的分离、提纯法，离心法，层析法，电泳法，光谱法以及分子杂交技术等。 ;;;;;（二）离心技术 离心技术是利用物体高速旋转时产生强大的离心力，使置于旋转体中的悬浮颗粒（指悬浮状态的细胞、细胞器、病毒和生物大分子等）发生沉降或漂浮，从而使某些颗粒达到浓缩或与其他颗粒分离之目的。 离心机转子高速旋转时，当悬浮颗粒密度大于周围介质密度时，颗粒离开轴心方向移动，发生沉降；如果颗粒密度低于周围介质的密度时，则颗粒朝向轴心方向移动而发生漂浮。 常用的离心机分类： “低速离心机”最高转速不超过6000rpm. “高速离心机”在25000rpm以下. “超速离心机”达30000rpm以上。;;;;离心方法主要有三大类型：差速离心、密度梯度离心、沉降平衡离心。 1．差速离心法。通过逐步增加相对离心力，使一个非均相混合液内形状不同的大小颗粒分步沉淀。 2．密度梯度离心法。离心前，离心管内先装入分离介质（如蔗糖、甘油等），使形成连续的或不连续的密度梯度介质，然后加入样品进行离心，具体又可分为： （1）速度区带离心法。离心前，离心管内先装入蔗糖、甘油、CsCl、Percoll等密度梯度介质，待分离样品铺在梯度液的顶部，离心管底部或梯度层中间，同梯度液一起离心，利用各颗粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同，使具有不同沉降速度的颗粒处于不同密度的梯度层内，达到彼此分离的目的。本法可分离各种细胞、病毒、染色体、脂蛋白、DNA和RNA等生物样品。;（2）预制梯度等密度离心法。要求在离心前预先配制管底浓而管顶稀的密度梯度介质，常用介质有蔗糖、CsCl、Cs2SO4等，待分离样品一般铺在梯度液顶上，如需挟在梯度液中间或管底部，则需调节样品液密度。离心后，不同密度的样品颗粒到达与自身密度相等的梯度层，即达到等密度的位置而获得分离。 （3）自成梯度等密度离心法。某些密度介质经过离心后会自成梯度，例Percoll，可迅速形成梯度，CsCl、Cs2SO4和三碘甲酰葡萄糖胺经长时间离心后也可产生稳定的梯度。需要离心分离的样品可和梯度介质先均匀混合，离心开始后，梯度介质由于离心力的作用逐渐形成管底浓而管顶稀的密度梯度，与此同时，可以带动原来混合的样品颗粒也发生重新分布，到达与其自身密度相等的梯度层里，即达到等密度的位置而获得分离。; 3．沉降平衡离心法。根据被分离物质的浮力密度差别进行分离，所用的介质起始密度约等于被分离物质的密度，介质在离心过程中形成密度梯度，被分离物质沉降或上浮到达与之密度相等的介质区域中停留并形成区带。 ;;1．根据分离的原理划分 （1）吸附层析。是利用混合物随流动相通过由吸附剂组成的固定相时，因吸附剂对各组分的吸附能力的不同，而使各组分流动速度不同，将各组分分离。吸附层析根据支持物装填方式的不同有柱层析和薄层层析类，前者常用于分离非极性或极性较小的有机物，后者用于分离氨基酸、类固醇激素等。 （2）分配层析。利用混合物随流动相（非极性溶剂）通过含极性溶剂的载体组成的固定相时，由于各组分在二相中的分配系数的不同，而使混合物各组分在两相间发生不同的分配现象而逐渐分开。分配层析应用最广泛的是纸层析。 ;（3）离子交换层析。离子交换层析是利用离子交换剂作为固定相，离子交换剂是一类具有酸性或碱性基团，能与溶液中的阳离子或阴离子发生交换的不溶性物质，流动相通常是具有一定pH值和一定离子强度的电解质溶液。将混合溶液加入离子交换柱，由于离子交换剂对混合液中各种离子具有不同的亲和力而产生不同的吸附作用，当流动相流经离子交换柱时，可以降低离子交换剂对吸附离子的亲和力而被交换洗脱下来，从而达到分离的目的。 （4）