植物人工微RNAamiRNA表达载体构建的方法学研究及其应用.pdfVIP

植物人工微妣～ (蛐il州A)表达载体构建的方法学研究 摘要 人工微RNA( ficial microRNA，amiRNA)是在天然miRNA前体序列的基础 上，按要求替换其中的miRNA及其互补区域，然后在生物体内按照mi对蛆的生物 合成途径而形成的外源小RNA分子。锄iRNA的高效、高特异性以及无离靶效应的 优点已经在多种植物中被证实，并被公认为是继hpRNAi技术之后的第二代植物基 因功能研究工具。 尽管如此，由于舭liRNA前体结构的特殊性，人们构建amiI矾A表达载体均过 程繁琐且 费用 昂贵 。为 了解 决这一 问题 ，让amiRNA技术在植物研 究 中应用更加广 泛，本研究建立了三种新颖、简单、高效、低成本、高通量的植物锄iRNA表达载 体构建技术： 1．基于一步PcR的无酶克隆和MAGIc的amiI矾A表达载体构建技术 首先通过本室创建的无酶克隆载体构建技术，构建了三个含有相应锄iRNA表 达 单 元 的 供 体 质 粒 pDonor-amiR3 19aFLcl 、 pDono 卜觚 1iRl59aPDs 和 pDonor．锄iRl64aE眦，然后