教学课件：《生物技术制药》.ppt

* 一 、酶的基础知识 （一）酶是生物催化剂 酶是生物细胞产生的、具有催化能力的生物催化剂。 催化高效性 专一性：结构专一性；立体异构专一性 酶具有不稳定性 * （二）酶的化学本质 蛋白质 酶 单纯酶 结合酶 （全酶）= 酶蛋白 + 辅因子 辅因子 辅酶 与酶蛋白结合得比较松的小分子有机物。 辅基 与膜蛋白结合得紧密的小分子有机物。 金属激活剂 金属离子作为辅助因子。 * 必需基团：这些基团若经化学修饰使其改变，则酶的活性丧失。 活性部位：酶分子中直接与底物结合，并和酶催化作用直接有关的部位。 必需基团 活性部位 维持酶的空间结构 结合基团 催化基团 专一性 催化性质 * 二、现代酶工程的主要内容： 1.酶的分离纯化、大批量生产及新酶和酶的应用开发； 2.酶和细胞的固定化及酶反应器的研究，包括酶传感器、反应检测； 3.酶生产中基因工程技术的应用及遗传修饰酶的研究； 4.酶的分子改造和化学修饰，结构与功能的研究； * 5.有机相中酶反应的研究； 6.酶的抑制剂、激活剂的开发与应用研究； 7.抗体酶、核酸酶的研究； 8.模拟酶、合成酶及酶分子的人工设计、合成研究。 * 三、酶的来源 酶的来源：酶的生产目前多数直接从生物体中提取分离。非常少的是合成,基因工程. 早期酶的生产多以动植物为主要原料，如激肽释放酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶。近10年来，研究发展了动植物组织培养技术，但周期长、成本高。工业生产一般都以微生物为主要来源。目前使用的千余种商品酶，大多数是微生物生产的。其特点是： * 1.微生物种类繁多，凡是动植物体内存在的酶，几乎都年从微生物中得到； 2.微生物繁殖快、生产周期短、培养简便，并可通过控制培养条件来提高酶的产量； 3.微生物具有较强的适应性，通过各种遗传变异的手段，能培育出新的高产菌珠。 * 泰欣生(尼妥珠单抗,Nimotuzumab，百泰药业)：重组人源化抗人表皮因子受体(EGFR)单克隆抗体注射液，2008年6月上市，人源化程度95%，是世界上第三个用于治疗实体瘤的单克隆抗体。 目前定价:50mg/10ml（3680元） 泰欣生上市不仅代表我国在单抗药物人源化技术领域取得了重大突破,更重要的意义在于突破了哺乳动物细胞规模化培养这一生物技术瓶颈 * * 碘［131I］美妥昔单抗注射液（西安基地） ［131I］人鼠嵌合型肿瘤细胞核单抗注射液（上海基地） 注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白”（商品名为“益赛普”）（上海基地） * 抗体制药的国内状态 目前国内正在进行临床前研究的抗体药物有：抗CEA嵌合抗体；抗破伤风抗体；抗乙型脑炎单抗；抗FabC1027，用于治疗肝癌。 瓶颈：大规模动物细胞培养工艺，而此类工艺属于欧美严禁出口的技术，长期以来对我国实行封锁。 * （1）概念 抗原决定族 （Epitope, Antigenic determinant） ● 一个抗原分子上可能有数个抗原决定基 ● 每个 抗原决定族 至少诱生一种专一性抗体 ● 蛋白质性质 抗原决定基 含有六个以上氨基酸 第二节、单克隆抗体及其制备 * （1）概念 抗原决定族 （Epitope, Antigenic determinant） ● 一个抗原分子上可能有数个抗原决定基 ● 每个 抗原决定族 至少诱生一种专一性抗体 ● 蛋白质性质 抗原决定基 含有六个以上氨基酸 第二节、单克隆抗体及其制备 * （2）多克隆抗体 (Polyclonal antibody) （2－1）概念 给动物接种抗原所获得的免疫血清或抗血清是多种抗体的混合物, 它是由多种抗原决定簇刺激多株B细胞增殖分化所产生的, 称为多克隆抗体. * （2－2 ）实验室制备多克隆抗体 研究、诊断用 所用动物：1 Balb/c小鼠，6－8周龄；雄性 2 大鼠 3 兔子生后约12周。 抗原：1 纯化的抗原（线性抗原或构型抗原） 2 非纯化抗原 技术关键：抗原制备 应用：免疫学检测 * 类毒素 毒素 马血清 抗毒素 超敏反应 抗体 抗原 * 马血清抗毒素的两重性： (1) 特异性抗体中和毒素 (2) 异种抗原，可刺激机体产生抗马血清抗体 马血清具有立即提供保护的优势，但异种gamma-球蛋白只是短期有效，常常导致病理合并症（血清病）和过敏反应。 * 人源多克隆抗体－血液制品 人的gamma-球蛋白是最理想的(同源性免疫球蛋白) ，但具有传播肝炎和爱滋病的风险。 献血员免疫（白喉毒素、狂犬病疫苗等） 少量采血测效价 大量采血 制备抗体 是 * （3）单克隆抗体(Monoclonal ant