酵母tRNA溶液操作说明.pdfVIP

酵母 tRNA 溶液 Yeast tRNA Solution Cat .:GT0265 保存：低温运输，-20℃保存 Cat .:GT0265 组分说明： GT0265 -A 成 份 GT0265 -A GT0265-B tRNA 溶液粗提液 1.5 mL - (5mg/mL) tRNA 溶液精提液 - 1.5 mL (5mg/mL) 使用手册 1 份 1 份 产品及特点 本产品分 A 和 B 两个规格，浓度均为 5mg/mL。A 是酵母 tRNA 粗提液，用作制备更高纯度（如分子生物 级）酵母 tRNA 的原材料。B 是精提液，是经过本公司 RNA 纯化试剂盒纯化的分子生物学级别的酵母 tRNA 溶 液，不含蛋白质和 DNA 污染，OD260/OD280 在 1.9 左右，可直接用作微量 RNA 提取和回收的助沉剂，也 可以用作原位杂交、Northern 杂交的封堵剂，对于探针为 RNA 的杂交试验尤其适用。 使用方法 一：以 tRNA 粗提液（ GT0265-A ）为材料，酚法制备 tRNA 精提液（ GT0265-B ） 1. 在 1 倍体积的 tRNA 粗提液中加入一倍体积的自备 Tris 饱和酚，振荡混匀后 12000- 15000 g 离心 3 分钟 得上清。 2. 在上清中再加入一倍体积的自备 Tris 饱和酚和 0.2 倍体积自备的氯仿，振荡混匀后 12000- 15000 g 离心 3 分钟得上清。 3. 重复此步直到酚相和水相之间没有白膜出现。一般需要 2-4 次抽提。 4. 在上清中加入 0.1 倍体积的自备 3M NaAc （pH5.2）和 2 倍体积的自备无水乙醇，振荡混匀。 5. 12000- 15000 g 离心 15 分钟以上，小心移弃上清。 6. 用 1mL 自备 75%乙醇洗一次（即加入 1mL 75%乙醇，振荡混匀后 12000- 15000 g 离心 5 分钟，小心 移弃上清）。 7. 短暂离心数秒，小心移弃残留液体，所得沉淀即是精提的酵母 tRNA ，可以溶解在自备的 DEPC 水中，UV 测定其浓度，然后直接用于各种分子生物学实验。注意：tRNA 比较短，又是单链，所以电泳时结合 EB 等 染料的能力很弱，测定其浓度时最好不要使用电泳比较法，而要使用分光光度法。 注意：此法得率较高，但缺点是不能去除部分多糖污染，因为多糖也能在醇沉淀时沉淀下来。如果最后得到的溶液带 颜色，则需要用本公司 RNA 纯化试剂盒精提，详细过程见该产品使用手册。 二：tRNA 精提液（ GT0265-B ）作为杂交封堵剂 本产品可以作为原位杂交、Northern 杂交和 RNA 斑点杂交的封堵剂，也可以作为 Southern 杂交和 DNA 斑点杂交的封堵剂，但不适于作为菌斑杂交。其在杂交液或预杂交液中的终浓度为 100ug/mL。 如果使用 RNA 探针，最好使用本产品做封堵剂，以保护 RNA 探针。