细胞生物学： 实验三 乳鼠肾细胞原代培养.pptVIP

实验三 乳鼠肾细胞原代培养 动物细胞的原代培养 细胞原代培养是指直接从有机体获取组织，用一定的方法（机械分离、酶消化）将其分散成单个细胞后所进行的体外无菌培养。 步骤 动物消毒　 取肾 　D-Hank’s液清洗1次 37OC，25min/次 剪肾 　胰酶消化 　 取上清夜，加入1毫升培养液 （终止胰酶） 　　　　　2000rpm，10min 离心收集细胞 　　　 用培养基制备细胞悬液4ml 计数,测成活率 分装培养 （每瓶4ml细胞悬液） 培养细胞的观察 游离期：细胞为圆形，折光率高。 吸附期（贴壁）：细胞悬液静置培养数小时后细胞可贴壁，呈多边形或梭形。 生长期：细胞快速生长和分裂，直至长满瓶壁，形成细胞单层。细胞透明，颗粒少，细胞界限明显，可隐约看到细胞核。 维持期：当达到一定密度时，细胞便停止分裂。此期细胞界限逐渐模糊，胞浆内颗粒增多，培养液逐渐变酸（变黄）。 酚红在培养基中用作PH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性是为紫色。 培养细胞的观察 衰老期：当细胞长满瓶壁后，如不及时换液和传代培养，由于液内营养物缺乏和代谢物积累，细