人教版选修三12《基因工程的基本操作程序》.pptxVIP

1．2　基因工程的基本操作程序;学习导航 1.掌握目的基因获取的常见方法。 [难点] 2.学会基因表达载体构建的方法和要求。 [重点] 3.理解目的基因导入受体细胞的具体过程。 4.掌握目的基因检测与鉴定的具体操作。 [要点];;基因文库包括两种：________文库，即包含一种生物所有基因的文库；__________文库,即只包含一种生物的一部分基因的文库，如cDNA文库。 2.利用PCR技术扩增目的基因 (1)PCR的含义：是一项在生物______复制特定DNA片段的核酸合成技术。 (2)目的：短时间内大量扩增目的基因。 (3)原理：________________。;(4)过程： 第一步：加热至90～95℃,_______________ ; 第二步：冷却至_________℃，引物与两条单链DNA相应互补序列结合； 第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶(Taq酶)从引物起始进行互补链的合成。 如此重复循环多次。 (5)特点：指数形式扩增。;想一想 1．PCR过程中，需要解旋酶吗???所需要的DNA聚合酶应具有什么特点？ 【提示】　PCR过程中，DNA双链解开是在高温下完成的，不需要解旋酶；由于PCR过程温度较高，所以需要能耐高温的DNA聚合酶。;3.用化学方法人工合成 如果基因比较___,核苷酸序列又已知,也可以通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。 二、基因表达载体的构建 基因表达载体的组成：必须有启动子、____________、终止子以及标记基因等。;三、将目的基因导入受体细胞 1..转化 ___________进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为转化。 2.常用的导入方法 (1)将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是________转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法。;(2)将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是__________技术。此方法的受体细胞多是_________。 (3)将目的基因导入微生物细胞的方法： ①用_______处理细胞，使细胞处于能吸收周围环境中DNA分子的生物状态,这种细胞称为________细胞。 ②将重组表达载体DNA分子与感受态细胞混合，在一定温度下完成转化过程。;想一想 2．从细胞器的功能上分析，若通过基因工程生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？ 【提示】　不可以，糖蛋白上的糖链是在内质网和高尔基体上加工完成的，而内质网和高尔基体存在于真核细胞中，大肠杆菌是原核生物，细胞中不含有这两种细胞器。;四、目的基因的检测与鉴定 1..首先要检测转基因生物的DNA上是否插入了_________,方法是采用______________技术。 2.其次还要检测目的基因是否转录出了________,方法是采用__________技术。;3.最后检测目的基因是否翻译成________,从分子水平检测的方法是采用______________技术。 4.有时还需进行___________水平的鉴定。如需要做抗虫或抗病的接种实验等。;;比较项目;2.人工合成目的基因常用方法 人工合成目的基因的方法主要有两种。 (1)反转录法，主要用于相对分子质量较大而又不知其序列的基因，它是以目的基因的mRNA为模板，借助反转录酶合成碱基互补的单链DNA，然后在DNA聚合酶的作用下合成双链DNA，其过程如下：;(2)化学合成法，即依照某一蛋白质的氨基酸序列，通过密码子推算出其基因序列，然后直接合成目的基因，其过程如下：; (2012·青岛市高二期末)1970年，科学家证实了RNA病毒能依赖RNA合成DNA的过程，并发现了催化此过程的酶。下面为形成cDNA的过程和PCR扩增过程示意图。请根据图解回答下列问题：;(1)催化①过程的酶是________；核酸酶H的作用是________。 (2)③过程也称为DNA的变性，此过程在温度高达90～95 ℃时才能完成，说明DNA分子具有________性。;(3)由图中信息分析可知，催化②⑤过程的酶都是______________，两者在作用特性上的区别是____________________________________ ____________________________________。 (4)如果RNA单链中有碱基100个，其中A占25%，U占15%，则通过该过程合成的一个双链DNA片段中有胞嘧啶________个。;【解析】　根据图示可以看出，该过程是RNA在逆转录酶的催化作用下形成cDNA(负链DNA)，构成RNA—DNA中间体。中间体中的RNA再经过RNA酶H水解，而以剩下的负链DNA复制成双链DNA。①过程是由RNA合成DNA的过程，需要逆转录酶进行催化。②过程是以单链DNA复制获得双链