一种番茄红素含量的液相色谱-串联质谱检测方法发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 112067734 A (43)申请公布日 2020.12.11 (21)申请号 202010873756.2 (22)申请日 2020.08.26 (71)申请人 深圳华大基因股份有限公司 地址 518083 广东省深圳市盐田区洪安三 街21号华大综合园7栋7层-14层 (72)发明人 丑天胜　柯酩　任艳　吴志峰　 黄俊民　刘斯奇　 (74)专利代理机构 北京品源专利代理有限公司 11332 代理人 潘登 (51)Int.Cl. G01N 30/88 (2006.01) 权利要求书2页 说明书6页 附图7页 (54)发明名称 一种番茄红素含量的液相色谱-串联质谱检 测方法 (57)摘要 本发明公开了一种番茄红素含量的液相色 谱‑串联质谱检测方法，包括：(1)待测样本溶液 准备；(2)液相色谱分离；(3)串联质谱检测；(4) 待测样本中番茄红素含量的确定；其中，步骤(3) 中采用特定的番茄红素特征离子对。本发明确定 的番茄红素特征离子对能够准确用于定性定量， 所述方法稳定性和重复性好。 A 4 3 7 7 6 0 2 1 1 N C CN 112067734 A 权　利　要　求　书 1/2页 1.一种番茄红素含量的液相色谱-串联质谱检测方法，其特征在于，包括： (1)待测样本溶液准备； (2)液相色谱分离：在超高效液相色谱仪中，样本溶液与流动相A、B液在色谱柱上进行 分离，采用梯度洗脱方式进行洗脱； (3)串联质谱检测：通过梯度洗脱后的样本进入到串联质谱中，利用MRM模式进行离子 谱图采集从而得到样本谱图； (4)待测样本中番茄红素含量的确定：通过步骤(3)中获得的样本谱图的保留时间确定 番茄红素的色谱峰，并将所述番茄红素的色谱峰面积与标准曲线图进行比对，通过外标法 确定样品溶液中的番茄红素含量，其中，所述标准曲线图为不同浓度的标准品溶液的响应 值确定的色谱峰面积与对应的番茄红素浓度形成的线性关系图。 2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)所述待测样本为生产番茄红 素的微生物和/或其发酵液； 优选地，所述生产番茄红素的微生物和/或其发酵液为生产番茄红素的酵母和/或其发 酵液。 3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)包括如下步骤：将酵母及其发 酵液加入离心管中进行超声破碎，加入萃取液，涡旋震荡，萃取；离心并取上清液，上清液通 过有机相滤膜过滤，得到待检测番茄红素含量的样本溶液； 优选地，所述超声破碎的功率为100W，所述超声破碎的温度为15-25℃，所述超声破碎 的时间为3-5min；优选地，所述萃取液为石油醚丙酮溶液(1:10)，所述萃取液的加入量为 0.7-1.3mL，所述涡旋震荡的时间为4-6min，所述萃取的时间为8-15min；优选地，所述离心 温度为4℃，所述离心转速为13000rpm，所述离心时间为15-30min；优选地，有机相滤膜的孔 径为0.15-0.25μm。 4.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)中所述色谱柱为ACQUITY BEH C18色谱柱； 优选地，流动相A液为含1‰甲酸的水溶液(体积百分比)，流动相B液为含1‰甲酸的甲 酸-乙腈(1:1)溶液(体积百分比)； 优选地，所述超高效液相色谱仪的具体参数设置为：进样量为5μL，流速为0.5mL/min， 柱温箱温度设置为45℃； 优选地，所述梯度洗脱方式为采用如下所示的待测样品溶液中液相色谱洗脱梯度进行 洗脱：采用0.5ml/min的流速，在0、1、1