基因工程导论g.pptxVIP

会计学;接合作用 质粒DNA从一个细胞（细菌）转移至另一个细胞（细菌） 转化作用 transformation 通过自动获取或人为地供给外源DNA，使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型的过程;转导作用 transduction;第一节 基因工程的诞生;二、基因工程技术的诞生; ?第一个重组体的构建 1972年，美国斯坦福大学P.Berg等在PNAS上发表了题为∶“Biochemical methode for inserting new genetic information into DNA of Simian Virus 40:circular SV40 DNA molecules cotaining lamda phage genes and the galactose operon of Escherichia coli. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 69:2904-2909, 1972”，标志着基因工程技术的诞生。;第一个重组体构建; SV40病毒是猿猴病毒，是一种直径为450?的球形病毒，分子量为28×106道尔顿。SV40的DNA是环状双链结构，全长5243个碱基对。SV40DNA上有一个限制性内切酶EcoRⅠ的切点。;SV40病毒;◆当获得二聚体SV40DNA后，Berg等就证明了环状DNA被内切酶切成线性DNA后能够重新环化，并且能够同另外的分子重组。 ◆于是他们进行第二步的实验就是从λdvgal DNA中制备含有E.coli的半乳糖操纵子DNA，用上述同样的方法进行重组连接，并获得成功。; ;Boyer and Cohen;三 、基因工程大事记;1993 基因工程西红柿在美国上市 1997 英国罗斯林研究所 多莉羊 1999.9 中国获准加入人类基因组计划.负责测定人类基因组全部序列的1% 2000.6.26 科学家公布人类基因组工作草图 2001.2.11 公布人类基因组基本信息;胰岛素 人生长激素 干扰素 白细胞介素2 粒细胞集落刺激因子 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 红细胞生成素 EPO 组织纤溶酶原激活剂 生长激素 促生长素 抗血友病因子Ⅷ 脱氧核糖核酸酶 葡糖脑苷脂酶 鼠单克隆抗体 ; 基因工程(gene engineering) 又称基因操作(gene manipulation),重组DNA(recombinant DNA)。基因工程是以分子遗传学为理论基础,以分子生物学和微生物学的现代方法为手段,将不同来源的基因(DNA分子), 按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子,然后导入活细胞, 以改变生物原有的遗传特性,获得新品种, 生产新产品, 或是研究基因的结构和功能。;基因克隆示意图;第18页/共158页;Transform; 二、重组DNA或基因工程的主要内容 基因工程???操作过程主要由以下步骤组成： ①载体和目的基因的分离； ②载体和目的基因的切断； ③载体和目的基因的重组； ④重组DNA的转化和扩增； ⑤重组DNA的筛选和鉴定。 ;一）基因工程中常用的工具酶;一把特殊的剪刀—限制性内切酶的发现阿尔伯(Arber)、史密斯(Smith)和内森斯(Nathans)，获1978年诺贝尔生理学和医学奖;1953年，Arber研究噬菌体与细菌（A、B）的关系。 发现100-200个子代噬菌体中，只有1个可感染B，即其他的噬菌体在B中受到限制，唯有这一个受到修饰（甲基化）后感染成功。 细菌B：在缺甲硫氨酸的培养基中，细菌死亡。 原因：细菌无法对自己的DNA进行修饰。 假设：限制性内切酶与修饰酶。;第24页/共158页;第25页/共158页;1967年，Smith，分析限制性内切酶的识别和切割序列，认为它由5-6个碱基组成 原因：限制性酶将T7DNA切成平均长度为1000碱基的片段。 识别和切割序列：中心对称的回文结构。 限制性酶：HindⅡ Nathans：用限制性酶切割猴子SV40DNA，DNA测序。;限制性核酸内切酶(restriction enzyme)的分类;识别和切割位点 回文结构 4～6 bp 出现两种末端 粘性末端 粘端 平头末端 平端 同工异源酶：来源不同，但能识别和切割同一位点 同尾酶：识别序列不同，但产生相同的粘性末端 ;限制性内切酶II及其产生的3种不同末端;同切酶和同粘酶;Sma I 5′ ... C C C^G G G ... 3′ 3′ ... G G G^C C C ... 5′ ;BamH I 5′ ... G^G A T C C ... 3′ 3′ ... C C