高中生物选修一速简笔记.pdfVIP

高中化学选修 1 速简笔记 适于加强记忆，配套课本使用 5.1 DNA 粗提取、鉴定 1．1）DNA 在 0.1mol/L NaCl 溶液中溶解度最大， 2mol/L 溶解度最小。 DNA 不溶 于 酒精溶液 ，某些蛋白质能溶，进一步分离。 2 ）DNA 在 80oC 以上 变性，多数蛋白质不能忍受 60~80oC。 洗涤剂 瓦解细胞膜，对 DNA 无影响； 蛋白酶 水解蛋白质。 3）DNA 、 二苯胺 ，沸水浴 ，蓝色 。 2．1）选取： DNA 含量较高的生物组织。 2 ）动物：加蒸馏水，搅拌，过滤，收集滤液。 植物：切碎，加 洗涤剂、食盐 ，搅拌研磨，过滤，收集滤液。 3）纯化 DNA ：①控制 NaCl 浓度： 2mol/L ，过滤不溶物质， 0.14mol/L ，析出 DNA ，过滤 溶液中杂质， 2mol/L ，溶解 DNA 。直到丝状物不再增加为止。 ②滤液中加 嫩肉粉 ，木瓜蛋白酶 。 ③滤液 60~75oC 恒温水浴箱 保温，严格控制温度范围。 4 ）析出鉴定：过滤，加与滤液 体积相等、冷却 的 95% 酒精溶液 ，静置， 白色丝状物 。 用玻璃棒 沿一个方向 搅拌卷起，滤纸吸去水分。 2mol/LNaCl 溶液溶解，二苯胺试剂，混合均匀，沸水加热，冷却，变蓝。 3．1）血液，加 柠檬酸钠 ，防止凝固。 2 ）加洗涤剂时，轻缓、柔和，否则容易产生大量泡沫。 加入酒精、搅拌，以免加剧 DNA 分子破裂，不能形成絮状沉淀。 3）二苯胺试剂 现配现用 ：溶于冰醋酸，加浓硫酸，棕色瓶保存，临用前加 2% 乙醛溶液。 4 ）提取高纯度 DNA ，CTAB 、SDS、吐温 。 4 ．1）蒸馏水使鸡血细胞破裂： 低渗液体， 水分进入细胞胀破， 搅拌加速细胞膜、 核膜破裂。 2 ）洗涤剂：离子去污剂，溶解细胞膜，有利于 DNA 释放。 食盐：有利于 DNA 溶解。尼龙布过滤。 3）研磨目的：破碎细胞壁，使核物质容易溶解在 NaCl 溶液中。 不充分： DNA 提取量减少，导致看不到鉴定效果。 4 ）滤液中含核蛋白多糖、 RNA 。 5）反复溶解析出 DNA ：能除去与 DNA 溶解度不同的多种杂质。 6）方案原理：一 DNA 在不同浓度的 NaCl 溶液中溶解度不同 二蛋白酶分解蛋白质，三蛋白质、 DNA 变性温度不同。 5.2 多聚酶链式反应 1．1）分析细胞内参与 DNA 复制的各种组成成分与反应条件。 2 ）DNA 羟基末端 3 ′端，磷酸基团末端 5 ′端， DNA 合成方向： 从子链 5 ′端向 3 ′端延伸 。 3）变性： 80~100oC 双链解体。 4 ）条件： DNA 模板 、两种引物 、 四种脱氧核苷酸 、TaqDNA 聚合酶 、控制温度反复进行。 5）一般经历三十多次循环，步骤： 94oC 变性 、55oC 复性 、72oC 延伸 。 6）循环之前进行一次 预变性 ，增加大分子模板 DNA 彻底变性的概率。 7）两种引物使 DNA 聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的 DNA 序列， 使这段固定长 度的序列呈 指数扩增 。 8）微量离心管， 0.5mL ，微量移液器， PCR 仪或三个恒温水浴锅来回转移。 2．1）使用前高压灭菌，避免外源 DNA 因素的污染。 2 ）缓冲液和酶分装， -20oC 储存，使用前在冰块上缓慢融化。 1 3）每吸取一次，移液器枪头必须更换。盖严离心管后，用手指轻轻弹击侧壁，使混合均匀。 离心机，使反应液集中在离心管底部。 4 ）DNA 在 260nm 紫外线波段 有一强烈吸收峰。