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淀粉酶活力的测定 一、目的 学习和掌握测定淀粉酶（包括 α- 淀粉酶和 β- 淀粉酶）活力的原理和方法。 二、原理 淀粉是植物最主要的贮藏多糖， 也是人和动物的重要食物和发酵工业的基本原料。 淀粉经淀粉酶作用后生成葡萄糖、麦芽糖等小分子物质而被机体利用。淀粉酶主要包 括 α- 淀粉酶和 β- 淀粉酶两种。 α- 淀粉酶可随机地作用于淀粉中的 α-1,4- 糖苷键， 生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称 为液化酶。 β- 淀粉酶可从淀粉的非还原性末端进行水解，每次水解下一分子麦芽糖， 又被称为糖化酶。淀粉酶催化产生的这些还原糖能使 3,5- 二硝基水杨酸还原，生成棕 红色的 3- 氨基 -5- 硝基水杨酸，其反应如下： 淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。 用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准 曲线，用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量，以单位重量样品在一 定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。 淀粉酶存在于几乎所有植物中，特别是萌发后的禾谷类种子，淀粉酶活力最强， 其中主要是 α- 淀粉酶和 β- 淀粉酶。两种淀粉酶特性不同， α- 淀粉酶不耐酸，在 pH3.6 以下迅速钝化 。 β- 淀粉酶不耐热，在 70℃15min 钝化 。根据它们的这种特性，在测定 活力时钝化其中之一，就可测出另一种淀粉酶的活力。本实验采用加热的方法钝化 β- 淀粉酶，测出 α- 淀粉酶的活力。在非钝化条件下测定淀粉酶总活力（ α- 淀粉酶活力 + β- 淀粉酶活力），再减去 α- 淀粉酶的活力，就可求出 β- 淀粉酶的活力。 三、实验材料、主要仪器和试剂 1．实验材料 萌发的小麦种子（芽长约 1cm） 2 ．仪器 （1）离心机 （2 ）离心管 （3 ）研钵 （4）电炉 （5 ）容量瓶： 50mL×1, 100mL ×1 （6 ）恒温水浴 （7 ）20mL具塞刻度试管× 13 （8 ）试管架 （9 ）刻度吸管： 2mL ×3, 1mL ×2, 10mL ×1 （10）分光光度计 3．试剂（均为分析纯） （1）标准麦芽糖溶液（ 1mg/mL）：精确称取 100mg麦芽糖，用蒸馏水溶解并定容 至 100mL。 （2 ）3,5- 二硝基水杨酸试剂：精确称取 3,5- 二硝基水杨酸 1g，溶于 20mL2mol/L NaOH溶液中，加入 50mL蒸馏水，再加入 30g 酒石酸钾钠，待溶解后用蒸馏水定容至 100mL。盖紧瓶塞，勿使 CO2 进入。若溶液混浊可过滤后使用。 （3 ）0.1mol/L pH5.6 的柠檬酸缓冲液 A 液： （0.1mol/L 柠檬酸）：称取 C HO ·HO21.01g ，用蒸馏水溶解并定容至 1L。 6 8 7 2 3 6 5 7 2 B 液：（ 0.1mol/L 柠檬酸钠）：称取 NaC HO ·2HO 29.41g ，用蒸馏水溶解并定 容至 1L。 取 A 液 55mL与 B 液 145mL混匀，既为 0.1mol/LpH5.6 的柠檬酸缓冲液。 （4 ）1%淀粉溶液：称取 1g 淀粉溶于 100mL 0.1mol/L pH5.6 的柠檬酸缓冲液中。 四、操作步骤 1．麦芽糖标准曲线的制作 取 7 支干净的具塞刻度试管，编号，按表 1 加入试剂： 管