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DNA粗提取及判断导教学设计 DNA粗提取及判断导教学设计 DNA粗提取及判断导教学设计 【课题 5】： 课题 1 DNA 的粗提取与判断 【知识回忆】 一、实验原理 1、提取 DNA的方法 提取生物大分子的根本思路是 。关于 DNA的粗提取而言，就是要利用 、 等在物理和化学性质方面的差异，提取 DNA，去除其他成分。 1〕 DNA的溶解性 思虑题 1： DNA在氯化钠溶液中的溶解度有什么特点？对此有什么应用？ 2〕DNA对酶、高平易冲洗剂的耐受性 蛋白酶能水解 o 解 ，但对 DNA没有影响。 3〕 DNA的判断 思虑题 2：依据什么原理来判断 DNA？ 在 条件下， DNA 遇 会被染成  ，但是对 没有影响。 以上才会变性。冲洗剂能够瓦 色，所以二苯胺能够作为判断 DNA的试剂。 二、实验设计 1、实验资料的采纳  凡是含有  的生物质料都能够考虑，但是使用  的生 物组织，成功的可能性更大。 2、 破碎细胞，获得含 DNA的滤液 1〕 制备和提取细胞核物质：动物细胞的破碎比较简单 ，以鸡血细胞为例。 在鸡血细胞液中参加必然量的 ，同时用 搅拌，获得鸡血细胞液。过滤后收集研 磨液； 若是实验资料是植物细胞，需要先用 溶解细胞膜。比方，提取洋葱的 DNA时，在切 碎的洋葱中参加必然的 和 ，进行充分的搅拌和研磨。过滤后收集研磨液。 2〕溶解细胞核的 DNA： 向收集的滤液中参加  的溶液，搅拌使  DNA呈溶解状态。 3、去除滤液中的杂质 方案一的原理是 DNA在不一样浓度 NaCl 溶液中溶解度不一样； 方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质，不分解 DNA；方案三的原理是蛋白质和 DNA的变性温度不一样。 4、 DNA的析出与判断 将办理后的溶液过滤 ，参加与滤液体积 、冷却的 ，静置 ，溶液中会 DNA 吸取上面的水分。 取两支 20ml 的试管，各参加物质的量浓度为 的 NaCl 溶液 5ml，将丝状物放入其中 一支试管中， 用玻璃棒搅拌， 使丝状物溶解。 尔后，向两支试管中各参加 4ml 的 混杂均匀后，将试管置于 中加热 5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的 变化，看看溶解有 DNA的溶液可否变 。 三、实验案例：以鸡血细胞 DNA的提取和判断为例：  。 1．制备鸡血细胞液 ：在鸡血中参加质量浓度为 0． 1g/mL 的柠檬酸钠溶液，离心办理；参加柠檬酸钠的目的： 2．提取鸡血细胞的细胞核物质 ：向鸡血细胞液中参加蒸馏水，搅拌、过滤；思虑 1：参加蒸馏水的目的是什么？为什么能到达此目的？ 3．溶解细胞核内的 DNA：参加 2mol/L 的氯化钠溶液，搅拌，使 DNA呈溶解状态； 4．析出含 DNA的粘稠物 ：参加蒸馏水，用玻璃棒搅拌； 思虑题 2：此时参加蒸馏水的目的是什么？ 5．滤取含 DNA的粘稠物：过滤； 思虑题 3：此次过滤与前一次过滤的目的相同吗？为什么？ 6．将 DNA的粘稠物再溶解 ：参加 2mol/L 的氯化钠溶液，搅拌，使 DNA呈溶解状态； 7．过滤含有 DNA的氯化钠溶液 ： 思虑题 4：这一步骤过滤的目的是什么？ 思虑题 5：为什么屡次地溶解与析出 DNA，能够去除杂质？ 8．提取含杂质较少的 DNA：参加冷却的 95%的酒精，搅拌； 思虑题 6：这一步骤的目的是什么？ 9． DNA的判断 ：取两支试管，各参加 0． 015mol/L 的氯化钠溶液 5mL，一支参加提取的 DNA， 两支各参加 4mL的二苯胺试剂。混杂均匀后置于开水中加热。 四、操作提示 1、以血液为实验资料时，每 100ml 血液中需要参加 3g ，防范 。 2、参加冲洗剂后，动作要 、 ，否那么简单产生大量的泡沫，不利于后续步骤 地操作。参加酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要 ，省得 ，以致 DNA分子 不能够形成絮状积淀。 3、二苯胺试剂要 ，否那么会影响判断的收效。 4． DNA的溶解度与 NaCl 溶液浓度的关系： 当 NaCl 溶液浓度低于 L 时，随浓度的高升， DNA的溶解度降低；当 NaCl 溶液浓度高于 L 时， 随浓度高升， DNA的溶解度高升。 5．盛放鸡血细胞液的容器，最好是塑料容器。 鸡血细胞破碎今后释放出的 DNA，简单被玻璃容器吸附，由于细胞内 DNA的含量本来就比较 少，再被玻璃容器吸附去一局部，提取到的 DNA就会更少。所以，实验过程中最好使用塑料 的烧杯和试管，这样能够减少提取过程的 DNA的损失。 [ 典例剖析 ] 本实验中有三次过滤： ⑴过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液⑵过滤含粘稠物的 LNaCl 溶液 ⑶过滤溶解有 DNA的 2mol/LNaCl 溶液 以上三次过滤分别为了获得〔 〕 A 含核物