一节核酸酶促降解教学借鉴.pptVIP

第一节 核酸的酶促降解 第三节 核苷酸的合成 第二节 核苷酸分解代谢 第一节 核酸的酶促降解 核酸酶 核苷酸酶 核苷酸磷酸化酶 核酸 核苷酸 核苷 碱基+戊糖 磷酸 一、核 酸 酶 1、核酸酶的分类 （1）根据对底物的 专一性分为 （2）根据切割位点分为 核糖核酸酶(RNase) 脱氧核糖核酸酶(DNase) 非特异性核酸酶 核酸内切酶 核酸外切酶 核酸内切兼外切酶 3、脱氧核糖核酸酶 5′ p p p p OH B p p p p 3′ B B B B B B B 牛脾脱氧核糖核酸酶（DNase II） 牛胰脱氧核糖核酸酶（DNase I） 特异性核酸酶，只作用于DNA 原核生物中存在着一类能识别外源DNA双螺旋中4-8个碱基对所组成的特异的序列，并在此序列的某位点水解DNA双螺旋链，产生粘性末端或平齐末端，这类酶称为限制性内切酶（ristriction endonuclease）。 限制性内切酶 具有很强的专一性， 有特异的识别位点，通常具有二重旋转对称性的回文序列 限制性内切酶类型 Ⅰ型：分子量大于105，多亚基，需S-腺苷蛋氨酸、ATP和Mg2+ ，识别位点与切割位点相差甚远，产物为异质，是限制与修饰相排斥的多功能酶。 Ⅱ型：分子量小于105，需Mg2+ ，切割位点位于识别 位点上，产物为专一性片段，不具修饰酶功能。现在分子生物学研究所用的限制性内切酶均为此类。 Ⅲ型：识别位点为5-7bp的非对称序列 ，切割位点在顺序之外离识别 序列5-10bp，切割双链，个别也切割单链。是限制与修饰相多功能酶。 常用的DNA限制性内切酶的专一性 酶 辨认的序列和切口 说明 ‥ ‥A G C T ‥‥ ‥ ‥T C G A ‥ ‥ ‥ ‥G G A T C C ‥‥ ‥ ‥C C T A G G ‥‥ ‥ ‥A G A T C T ‥‥ ‥ ‥T C T A G A ‥‥ ‥ ‥G A A T T C ‥‥ ‥ ‥C T T A A G ‥‥ ‥ ‥A A G C T T‥‥ ‥ ‥T T C G A A ‥‥ ‥ ‥G T C G A C ‥‥ ‥ ‥C A G C T G ‥‥ ‥ ‥C C C G G G ‥‥ ‥ ‥G G G C C C ‥‥ Bam H I Alu I Bgl I Eco R I Hind Ⅲ Sal I Sma I 四核苷酸，平端切口 六核苷酸，平端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口 限制性内切酶的命名和意义 Eco R I 序号 属名 Escherichia 种名 coli 株名 R 例：Eco R I，是从大肠杆菌（E.coli）R菌珠中分离出的第一种限制性内切酶 限制性内切酶是分析染色体结构、制作DNA限制图谱、基因体外重组等研究中不可缺少的工具，誉为“分子手术刀”，用来切割DNA分子。 与连接酶（分子缝合针），修饰酶，聚合酶等被称为基因工程的工具酶 第二节 核苷酸分解代谢 2、嘧啶的降解 1、嘌呤的降解 核苷酸酶 核苷磷酸化酶（DNA、RNA） 核苷酸 核苷 碱基+戊糖－1－磷酸 磷酸 核苷水解酶 碱基+戊糖 RNA 腺嘌呤和鸟嘌呤要经过脱氨氧化转变为黄嘌呤再进行降解 不同生物分解嘌呤的酶系不一样 生物进化程度愈高，分解嘌呤的能力愈差 嘌呤的分解 人、猿、鸟 非灵长类哺乳动物 硬骨鱼 尿囊酸 鱼类、两栖类 尿素 乙醛酸 CO2 NH3 低等无脊椎动物 关键酶：黄嘌呤氧化酶 抑制剂－别嘌呤醇 最终产物：尿酸 正常人：血尿酸 119-357 μmol/L （2-6 mg/dl） 男 267.7 μmol/L （4.5 mg/dl） 女 208.2 μmol/L （3.5 mg/dl） 血尿酸 8 mg/dl 结晶 沉积组织 痛风（gout） 嘧啶的分解 脱氨基 还原 打破环内双键 水解 开环 再水解 第三节 核苷酸的合成代谢 一、核糖核苷酸的生物合成 二、脱氧核糖核苷酸的生物合成 三、单核苷酸转变成核苷二磷酸和核苷 三磷酸