矿产资源微生物技术应用微生物技术应用基本实验.ppt

资源微生物技术;第三章 微生物技术基本试验;一、培养基的配制;西尔弗门(Silverman)培养基配制方法;利瑟恩(Leathen)培养基;2号培养基的配制方法;液体培养基的配制;固体培养基的配制; 把少量的凝固剂加入到液体培养基中，就制成了半固体培养基。以琼脂为例，它的用量在0.2～0.5%之间。 这种培养基有时可用来观察微生物的动力，有时用来保藏菌种。 ;培养基的配制;培养基的配制;二、灭菌方法;二、灭菌方法;二、灭菌方法;二、灭菌方法;4.高压蒸汽灭菌法：是灭菌效果最好、目前应用最广的灭菌方法。方法是在一密闭蒸锅—高压蒸汽灭菌器内进行的。通常采用纯饱和蒸汽压为121.5kPa，温度达125℃,维持20～30分钟，可杀死包括细菌芽胞在内的所有微生物。适用于各种耐热、体积大的培养基的灭菌，也适用于玻璃器皿、工作服、耐高温塑料用品等物品的灭菌。;二、灭菌方法;试管或锥形瓶口的密封方法;棉塞的叠法;高压蒸汽灭菌锅;灭菌器;矿产资源微生物技术应用微生物技术应用基本实验;高压蒸汽灭菌锅使用注意事项;高压蒸汽灭菌步骤;微孔滤膜过滤法;;无菌操作台;2、点燃酒精灯； 3、将接种环的钨丝在酒精灯火焰上加热变红（灭菌）， 4、用接种环在菌种保存试管中轻轻刮少许细菌， 5、快速将带有细菌的接种环浸入液体培养基中； 或在固体培养基中画“之”字形或“井”字形。见下图;;倾注平板;　接种和分离工具 1 .接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀 ;矿产资源微生物技术应用微生物技术应用基本实验;矿产资源微生物技术应用微生物技术应用基本实验;移接斜面时常用的接种方法： 划线接种 点接种 穿刺接种 涂布接种 液体接种 注射接种;斜面接种时的无菌操作 (1)接种灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)接种 (6)塞好棉塞 ;四、细菌总数目的显微镜计数方法;;;;;;四、细菌总数目的显微镜计数方法;原理： 平板菌落计数是将待测样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散成单个细胞，去一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，一个菌落就可以看成是由一个细胞繁殖而成的。;操作步骤： 无菌平皿编号→制备菌悬液→ 倾注平板→ 培养(48h) → 计数 ;矿产资源微生物技术应用微生物技术应用基本实验;矿产资源微生物技术应用微生物技术应用基本实验;注意事项： 倒平板时要注意控制培养基的温度。 稀释操作时，要尽量减少样品稀释误差，而且每个稀释度的菌液应各用一支无菌吸管。 为使菌落能在平板上均匀分布，样品液加入平皿后，应尽快倾注培养基并旋转混匀。;五、细菌的生长曲线;空气浴震荡器;矿产资源微生物技术应用微生物技术应用基本实验;草分枝杆菌的生长曲线;六、菌体的红外光谱测定样品制备方法;红外光谱的基本概念;为什么不同有机基团会产生不同的红外光谱？;矿产资源微生物技术应用微生物技术应用基本实验;＊ 化学键振动存在振动频率、存在振动能级。没 有外界干扰时，分子处于最低的振动能级。 ＊ 当红外光线照射到有机基团的化学键上时，分 子发生振动能级跃迁，跃迁需要吸收一定的能 量，该能量通常由照射的红外光线来供给。 ＊ 化学键的键能、键长、键角、种类如单键、双 键、叁键、共价键、离子键等是决定吸收多少 能量的内在因素，也就是决定红外光谱的峰位、 形状、峰强的内在因素。反过来说，红外光谱 可以提供分子内部键参数的信息。 ;红外光谱基本原理;红外光谱识谱法;4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 ;Transmittance %; 红外光谱分析表明，诺卡氏菌细胞成分中含有－OH、－SH、－NH2、－OP、C＝O、P＝O、S＝O等大量基团。当细菌表面遇到重金属离子时，这些基团都含有大量的孤电子对，可以成为电子供体。;* 吸收谱带区：分子中各键的振动频率常常受到整个分子的影响，但是有些键如羰基、—OH、—NH等因吸收峰位于高频区，故受分子中其他结构的影响较小，高频区4000～1333 cm－1的吸收峰比较稀疏，易于辨认，通常也叫特征谱带区、该区能用来鉴定官能团存在的吸收峰称作特征吸收峰。 * 指纹区：低频区1333～667 cm-1，这一区域谱带特别密集，犹如人的指纹，各种化合物在结构上微小差别在指纹区都会得到反映，因此，对鉴别有机化合物很有用处。 * 相关