附录ⅩⅢ C 微生物限度检查法.docxVIP

最新 精品 Word 欢迎下载 可修改 附录ⅩⅢ C 微生物限度检查法 微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、 辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。 微生物限度检查应在环境洁净度 10000 级下的局部洁净度 100 级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作， 防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。 单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区） 悬浮粒子、 浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。 供试品检查时， 如果使用了表面活性剂、 中和剂或灭活剂， 应证明其有效性及对微生物无毒性。 除另有规定外，本检查法中细菌及控制菌培养温度为 30℃～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为 23℃～28℃。 检验结果以 1g、 1ml、 10g、 10ml 或10c㎡为单位报告， 特殊品种可以最小包装单位报告。 检验量 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml 或 cm2 ）。 除另有规定外，一般供试品的检验量为 10g 或 10ml；膜剂为 100 cm2；贵重药品、 微量包装药品的检验量可以酌减。 要求检查沙门菌的供试品， 其检验量应增加 20g 或 20ml（其中 10g或10ml 用于阳性对照试验）。 检验时，应从 2 个以上最小包装单位中抽取供试品，大蜜丸还不得少于 4丸，膜剂还不得少于 4 片。 一般应随机抽取不少于检验用量（两个以上最小包装单位）的 3 倍量供试品。 供试品溶液的制备  根据供试品的理化特性与生物学特性， 采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不应超过 45℃。供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过 1 小时。 除另有规定外，常用的供试液制备方法如下。  1.液体供试品 取供试品 10ml，加 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至 100ml，混匀，作为1∶10 的供试液。油剂可加入适量的无菌聚山梨酯 80 使供试品分散均匀。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。  2.固体、半固体或黏稠性供试品  取供试品 10g， 加 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至 100ml， 用匀浆仪或其 他适宜的方法， 混匀， 作为 1∶10 的供试液。 必要时加适量的无菌聚山梨酯 80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。  3.需用特殊方法制备供试液的供试品  (1)非水溶性供试品 方法 1 取供试品 5g（或 5ml）， 加至含溶化的（温度不超过 45℃） 5g 司盘80、3g 单硬脂酸甘油酯、10g 聚山梨酯80无菌混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加入 45℃的 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至 100ml，边加边搅拌，使供试品充分乳化，作为 1∶20 的供试液。 方法 2 取供试品 10g， 加至含 20ml 无菌十四烷酸异丙酯（制法见附录ⅩⅢ B 无菌检查法中供试品的无菌检查项下） 和无菌玻璃珠的适宜容器中，必要时可增加十四烷酸异丙酯的用量，充分振摇，使供试品溶解。 然后加入 45℃的 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 100ml，振摇 5～10 分钟，萃取，静置使油水明显分层，取其水层作为 1∶10 的供试液。 (2)膜剂供试品  取供试品 100cm2 ，剪碎，加 100ml 的 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（必要时可增加稀释液），浸泡，振摇，作为 1∶10 的供试液。  (3)肠溶及结肠溶制剂供试品  取供试品 10g， 加 pH6.8 无菌磷酸盐缓冲液（用于肠溶制剂） 或 pH7.6 无菌磷酸盐缓冲液（用于结肠溶制剂） 至 100ml， 置 45℃水浴中， 振摇， 使溶解， 作为 1∶10 的供试液。  (4)气雾剂、喷雾剂供试品  取规定量供试品， 置冰冻室冷冻约 1 小时， 取出， 迅速消毒供试品开启部位，用无菌钢锥在该部位钻一小孔， 放至室温， 并轻轻转动容器， 使抛射剂缓缓全部释出。用无菌注射器吸出全部药液，加至适量的 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲 液（若含非水溶性成分，加适量的无菌聚山梨酯 80）中，混匀，取相当于 10g或 10ml 的供试品，再稀释成 1∶10 的供试液。  (5)贴膏剂供试品  取规定量供试品， 去掉贴膏剂的保护层， 放置在无菌玻璃或塑料片上， 粘贴面朝上。 用适宜的无菌多孔材料（如无菌纱布） 覆盖贴剂的粘贴面以避免