医学检验教材课件第四节 红细胞膜缺陷检验.ppt

第四节 红细胞膜缺陷检验 第一章 造血及造血调控 第一节 造血器官与造血微环境 临床血液学检验技术 上海交通大学医学院 王也飞 第四章 红细胞检验技术 第四节 红细胞膜缺陷检验 红细胞渗透脆性试验 自身溶血试验及其纠正试验 酸化甘油溶血试验 高渗冷溶血试验 红细胞膜蛋白电泳分析 伊红-5-马来酰亚胺（EMA）结合试验 红细胞膜蛋白基因检测 目录 重点提示 遗传性红细胞膜缺陷的检验项目 各检验项目的临床价值 一、红细胞渗透脆性试验 【实验原理】红细胞渗透脆性试验(erythrocyte osmotic fragility test)是红细胞在低渗盐水中，水通过细胞膜内渗，使细胞膜膨胀破坏而溶血。实验室常使用开始溶血、完全溶血的盐水浓度衡量红细胞脆性，其脆性大小主要取决于红细胞表面积与体积的比值，比值越低，红细胞对低渗溶液的抵抗力越小（渗透脆性增加），反之，则抵抗力较高（渗透脆性降低）。 【参考区间】 开始溶血：3.8～4.6g/L NaCl溶液； 完全溶血：2.8～3.2g/L NaCl溶液。（简易半定量法） 本实验是检测红细胞对不同浓度低渗盐溶液抵抗力的一个半定量试验。 正常人试验结果 遗传性球形红细胞增多症患者脆性升高 一、红细胞渗透脆性试验 【临床意义】 增高 主要见于遗传性球形红细胞增多症 、遗传性椭圆形红细胞增多症、部分自身免疫性溶血性贫血、遗传性口型红细胞增多症及Ⅱ型糖尿病等。 2. 减低 主要见于珠蛋白生成障碍性贫血、血红蛋白C、D、E病，低色素性贫血、阻塞性黄疸、脾切除术后、肝炎、肝硬化、肝癌等。某些中药（如当归）、磁场、紫外线亦可降低红细胞渗透脆性。 一、红细胞渗透脆性试验 1 2 3 4 5 6 7 8 9 100 80 60 40 20 % Lysis NaCl g/L 镰状细胞贫血 重型?-珠蛋白生成障碍性贫血 遗传性球形红细胞增多症 自身免疫性溶血性贫血 正常范围 一、红细胞渗透脆性试验 【应用评价】 本试验简便实用，但敏感性较差，对溶血性贫血的病因诊断有参考价值，但需结合其他检验结果进行综合分析。 2. 红细胞膜异常较轻微的病例应做红细胞孵育渗透脆性试验。将红细胞先置于37℃孵育24小时，使红细胞葡萄糖消耗，ATP储备减少，红细胞膜对阳离子的主动转运受阻，阳离子在细胞内蓄积，细胞膨胀，脆性增加后，再进行相应的渗透脆性试验（以50%溶血率的盐水浓度表示）。 3. 此法也可用于丙酮酸激酶缺陷症（pyruvate kinase deficiency，PKD）等红细胞酶缺陷性溶血的诊断。 一、红细胞渗透脆性试验 二、自身溶血试验及其纠正试验 【实验原理】自身溶血试验及其纠正试验(autohemolysis correcting test) 是测定患者血液在37℃孵育48h后，自发产生溶血的程度。红细胞在孵育期间，由于膜异常引起Na+内流明显增加，ATP消耗过多，或由于糖酵解途径酶缺陷所引起ATP生成不足等原因，导致ATP储备量减少，钠泵功能减弱，Na+和水在细胞内蓄积，红细胞膨胀、破裂溶血。在孵育时，加入葡萄糖或ATP作为纠正物，观察溶血能否被纠正，为自身溶血试验的纠正试验。 【参考区间】健康人红细胞在无菌条件下孵育48小时，不加纠正物的溶血率一般＜4.0%，加葡萄糖的溶血率＜0.6%，加ATP纠正物的溶血率＜0.8%。（分光光度法） 【临床意义】 1.遗传性球形红细胞增多症自身溶血率增加，能被葡萄糖或ATP纠正； 2.葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）缺乏症等戊糖旁路代谢缺陷的患者自身溶血率增加，能被葡萄糖纠正； 3.PK缺乏症时，不能利用葡萄糖产生ATP，其自身溶血率明显增加，不能被葡萄糖纠正，但能被ATP纠正； 4.获得性溶血性贫血如PNH、自身免疫性溶血性贫血及药物性溶血等加葡萄糖后效果不定，但是加ATP可明显纠正。 【应用评价】 本试验不够敏感和特异，仅对遗传性球形红细胞增多症有一定诊断价值，有助于溶血性贫血的鉴别诊断，但不能作为确诊试验。 二、自身溶血试验及其纠正试验 三、酸化甘油溶血试验 【实验原理】 (acidified glycerin hemolysis test，AGLT)是当甘油存在于氯化钠磷酸缓冲液的低渗溶液时，可阻止低渗溶液中的水快速进入红细胞内，减慢溶血过程。但甘油与膜脂质又有亲和性，可使膜脂质减少，促进红细胞溶血。检测时，吸光度随溶血的增加而下降。当红细胞膜蛋白或膜脂质有缺陷时，它们在pH 6.85的甘油缓冲液中较正常红细胞溶解速度快，导致红细胞悬液的吸光度下降至起始吸光度一半时所需的时间（AGLT50）明显缩短。通常测定AGLT50反映红