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微生物碳氮磷测定 It was last revised on January 2, 2021 土 壤 微 生 物 量 碳 氮 磷 测 定 方 法 一、试剂配制 二、微生物量碳试剂： 1 硫酸钾溶液[c(K2SO4)= ·L-1] ：称取硫酸钾（K2SO4，化学纯），先溶于300ml 去离子水中，加 热，转移溶液至容器中，再加少量去离子水溶解余下的部分，转移溶液至同一容器中，如此反复 多次。最后定容至1L；（需大量配制） 2 生物量C 氧化剂：在130℃下烘干两个小时的K2Cr2O7 与400mlH2O，2L 的优级纯浓硫酸混 合，配成的混合氧化剂溶液，在室温，棕色瓶中保存； 3 葡萄糖标准储备液（100mg/L）：准确称取的无水葡萄糖溶于1000mL 的容量瓶中，存放在4 ℃ 冰箱，使用时稀释为所需标准溶液； 微生物量氮试剂： 4 醋酸锂溶液：称取氢氧化锂(LiOH ·H2O)168g，加入冰乙酸(优级纯)279mL，，加水稀释到 1000mL，用浓盐酸或50 ％的氢氧化钠溶液调节pH 至； 5 茚三酮试剂：23g 分析纯水合茚三酮溶解于750ml 二甲基亚砜，加入250ml 醋酸锂缓冲液，混合 30min，使氧气和氮气排出；（注意此试剂在使用前一天配置，室温下密封保存） 6 氢氧化钠溶液（10mol/L）：400g 分析纯氢氧化钠溶于去离子水，稀释至1L； 7 柠檬酸缓冲液：分析纯柠檬酸和氢氧化钠，溶于900ml 去离子水，用10mol/L 氢氧化钠调节Ph 至，再用水稀释至1L； 8 乙醇溶液：95%分析纯乙醇与去离子水按体积比1：1 比例混合； 9 1mg/ml 的硫酸铵标准储存液：称取分析纯硫酸铵(称前105℃烘2h)溶于L 硫酸钾溶液中，并用硫 酸钾溶液定容至1000mL，摇匀，于4 ℃冰箱中保存。 10 ml 的硫酸铵[(NH4)2SO4]标准液：吸取10mL1mol/L 的硫酸铵标准储存液于100mL 容量瓶中， 用L 硫酸钾溶液定容至100mL．摇匀。此溶液最好现配现用。 11 工作曲线的制备：分别吸取、0 .50mL、、、、、 ml 的硫酸铵标准液于1000mL 容量瓶中,用／L 硫酸钾溶液定容至100mL，摇匀。然后取，按照样液的步骤进行显色和比色。 微生物量磷试剂： 12 1mol L-1 HCl 溶液：用 mL 的浓盐酸用蒸馏水定容至100 mL。 13 碳酸氢钠浸提液 [c （NaHCO3 ）= L-1，pH ] ：分析纯碳酸氢钠溶于800ml 蒸馏水，用1mol L-1 NaOH 溶液缓慢调节pH 至，再用蒸馏水定容至1L。注意该浸提液放置时期过长时，因CO2 释放 使溶液pH 升高。 14 硫酸溶液[c （H2SO4 ）= L-1]：分析纯浓硫酸（H2SO4，ρ= ml-1），用蒸馏水稀释定容至 500ml。 14 钼酸铵溶液（4% ）：分析纯钼酸铵溶于蒸馏水，定容至500ml。 16 抗坏血酸溶液[c （C6H8O6 ）= L-1]：抗坏血酸溶于75ml 蒸馏水。抗坏血酸溶液极易被氧化， 应在使用时当天配制。如需保存可于75ml 此溶液中加入25m 乙烯二胺四烷基醋酸二钠和蚁酸使 其稳定。 17 酒石酸锑钾溶液[ ρ（Sb ）= 1mg ml-1]：分析纯酒石酸锑钾溶于蒸馏水，定容至100ml。 18 混合显色液：取上述125ml 硫酸溶液与钼酸铵溶液混合，再加入75ml 抗坏血酸溶液和酒石酸锑 钾溶液，混匀。此溶液保存时间不宜超过24h 。 19 标准磷酸二氢钾溶液[ ρ（KH2PO4 ）= 4 μg P ml-1]：分析纯磷酸二氢钾（称量前先经105℃烘 2～3h ），溶于少量蒸馏水，再加入少量硫酸，用蒸馏水定容至1L，即为40 μg P ml-1 磷贮存液， 置4 ℃下保存。取50ml 贮存液稀释至500ml，即得到浓度为4 μg P ml-1 磷溶液，此溶液不宜久 存。 二、样液制作 1 土壤灭菌 （1）土壤混合均匀后过2mm 筛，除去根、秸秆、石头等杂质，烘干法测定土壤样品含水量，以 及土壤田间饱和持水量（一般是土壤质量的30% ）； （2 ）调节土壤含水量到田间饱和持水量的80% （水稻土适当冷冻干燥）左右。一般调节土壤含水 量到25%； （3 ）每个样品称取相当于10 克干土的土壤样品于100 毫升塑料瓶中。（或称10 克样品后根据含 水量换算）； （4 ）塑料瓶盖上盖（注意盖上要钻孔以防止微