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微生物考核肛拭子（增菌及质控修改） 微生物质控考核菌种的鉴定 常州市疾病预防控制中心 杜强 徐晓怡 王小萍等 菌种鉴定是疾病预防控制中心实验室常见的考核方式之一。它不但证明了该实验室有 能力进行规定类型的检测和（或）校准，而且对于该实验室管理和技术的提高也具有十分 重要的促进作用。本中心于今年 8 月份接受了省疾控的微生物质控考核并获得了较好的成 绩，现将情况简述如下。 1 材料和方法 1．1 考核材料：一支带有未知致病菌的肛拭子。 1．2 考核要求：假设此肛拭子是来源于一腹泻病人，要求从中检出一至数种致病菌， 提示可能菌种范围限定于申报的数种腹泻致病菌。时间要求 3 天。 1．3 检验试剂： 本次检测培养基为宜兴万石培养基厂产品，微量生化管由浙江省 军区后勤卫生防疫检验所提供，沙门菌诊断血清（56 种）由成都生物制品研究所提供，志 贺菌诊断血清（50 种）和出血性大肠杆菌 O157 由兰州生物制品研究所提供，均在有效期 内。 1．4 检验依据：GB/T 4789-2021 食品卫生国家标准、《食品卫生检验方法注解 （微生物部分）》（孟昭赫） 2 检验步骤及结果判断 2．1 确定检测目标：首先根据检测要求，确定可能的菌种有沙门氏菌、 志贺氏菌、 金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌、致病性大肠埃希氏菌共 7 种。 2．2 增菌及平板划线分离：无菌操作，取肛拭子接种于营养肉汤内，37℃培养24h 后 分别划线接种于以下各类选择性平板： 两块 SS 平板（编号为 1-A 和 1-B）， 37℃，培养 24h； 两块血平板（编号为 2-A 和 2-B）， 37℃，培养 24h。 两块氯化钠蔗糖平板（编号为 3-A 和 3-B）， 37℃，培养 24h。 两块 4 号琼脂平板（编号为 4-A 和 4-B）， 37℃，培养 24h。 2．3 平板生长情况： 两块 SS 平板（编号为 1-A 和 1-B）上有三类菌落，一类为无 色半透明，中等大小，圆整润滑，中心黑色的菌落生长（编号为A），一类为中等大小， 略微泛红，湿润，光滑的菌落（编号为B）。一类为较小，扁平，生长不良，有粘性但不 易挑起的菌落（编号为C）。革兰氏染色均为阴性无芽胞杆菌。 两块血平板（编号为 2-A 和 2-B）上菌落较多且杂，很难区分，但可观察到没有金黄 色葡萄球菌和溶血性链球菌的明显典型的菌落，及其两者较典型的溶血现象。 两块氯化钠蔗糖平板（编号为 3-A 和 3-B）上有一类菌落，为中等大小，不透明，光 滑，湿润的菌落，因不发酵蔗糖而呈绿色（编号为D）。革兰氏染色为阴性无芽胞杆 菌，悬滴法镜检运动活泼， 两块 4 号琼脂平板（编号为 4-A 和 4-B）上无菌落生长。 2．4．生化鉴定： 2．4．1 A 号菌株，因产 H2S，初步怀疑为沙门菌，进行进一步的的生化反应。结果 见表 1。 第 页 表 1 A 号菌株生化检测项目结果 生化项目 葡萄糖 乳糖 麦芽糖 木糖 阿拉伯糖 蔗 糖 甘露糖 鼠李糖 棉子糖 ONPG 甘露醇 结果 ＋ － ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ － ＋ + 生化 项目 肌醇 侧金盏花醇 卫矛醇 山梨醇 葡萄糖铵 甲基红 VP 靛基质 西蒙氏枸椽酸盐 水 杨素 覃糖 结果 － － － ＋ － ＋ － － ＋ － ＋ 生化项目 赖氨酸脱羧酶 精氨酸水 解酶 鸟氨酸脱羧酶 尿素 KCN 丙二酸钠 明胶 七叶苷 硝酸盐还原 苯丙氨酸 动力 结果 － ＋ － ＋ ＋ － － － ＋ － + 根据生化反应结果，不符合沙门氏菌的生化反应定义， 且血清凝集实验也为不典型的弱阳性，查对生化反应结果，最后确定为条件致病菌弗劳地 枸椽酸杆菌［1］。 2．4．2 B 号菌株，因在 SS 上略微泛红，初步怀疑为致病性大肠埃希氏菌，进行进 一步的生化反应。结果见表 2。 表 2 B 号菌株生化检测项目结果 生化项目 氧化酶 动力 靛基质 尿素 硫化氢 甲基红 VP 乳糖 动力 结果 - + + - - + - + + 生化项目 阿拉伯糖 谷氨酸 赖氨酸脱羧酶 精氨酸水解酶 鸟氨酸脱羧酶 木糖 水杨素 葡萄糖 麝香草酚兰抑制 结果 + - + - + + - + ＋ 生化项目 明胶 侧金盏花醇 苯丙氨酸 硝酸盐还原 西蒙