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第二章 第三章 第四章 电镜 1. 电镜、分辨率、透射电子、二次电子、电子束、超薄切片、免疫电镜技术 电镜 ：以电电子束为光源， 电磁场为透镜， 利用电子散射产生的信号进行显微成像的具有 高分辨率和放大倍率的显微镜。电镜用于研究组织和细胞的超微结构 分辨率 ：用于表示人眼和光学仪器能够辨别的两点之间最小距离的标志。人 0.2mm ，光 镜 0.2um 。分辨率是衡量电镜性能的重要指标。 透射电子： 当样品厚度小于 100nm 时，部分电子可穿透样品，将穿透样品的电子叫做透 射电子。 （利用透射电子信息成像的称为透射电镜） 二次电子： 在入射电子的轰击下 ,样品表面 5-50 nm 深度激发出来的电子称为二次电子。 （利用二次电子信息成像的称为扫描电镜） 电子束： 又称电子射线，电子束带负电荷，具有光的波动性、可折射性。电镜利用电子束 作为“光源”成像。 超薄切片 ：将环氧树脂包埋的组织块切成 100nm 以下的薄切片称为超薄切片，超薄切片 经电子染色后在 TEM 下观察组织细胞内部的超微结构。 immune electron microscopy ：免疫电镜技术是将免疫学方法与电子显微镜技术相结合， 利用抗原与抗体特异结合的特性，在超微结构水平定位特异大分子的技术。 2. 电镜在医学领域的应用 观察细胞器和组织器官的超微结构；观察病毒和细菌等；观察组织细胞超微病理结构； 用于临床疾病的诊断；观察生物材料复合体及模式生物等 3. 从分辨率、放大倍率、成像信号、样品制备、图像特点和应用几方面对透射电镜和扫描 电镜进行比较 TEM 分辨率为 0.1nm ，放大倍率是 100 万倍，成像信号为透射电子信号成像，样品制备 过程复杂，要制成 50～ 100nm 的超薄切片，图像特点为二维结构，平面图像， TEM 用于 观察组织细胞内部的超微结构。 SEM 分辨率为 0.6nm ，放大倍率是 80 万倍，成像信号为二次电子信号成像，样品制备方 法较简单，标本可大而厚，图像特点为三维结构图像，立体感较强， SEM 用于观察样品 表面及其断面立体形貌。 4. 了解细胞内部的超微结构变化应选择哪种类型的电镜，为了保证良好的超微构，在样本 取材及固定时应注意什么？如果是培养细胞，细胞数量一定要达到多少？ 了解细胞内部的超微结构变化应选择 TEM 。 为保证良好的超微结构，在样本取材及固定时应注意做到快、小、轻、冷。快：在 1 分钟 内固定组织，尽可能保持其生活状态，因为瞬间的拖延都会导致细胞超微结构的变化。小： 组织块必须切成 1mm3的小块，组织块过大其中央得不到及时固定会发生细胞自溶现象。 轻： 不要牵拉、锯、挤压组织。要用锐利的刀片，避免细胞受到损伤。冷：低温操作， 4℃保存， 降低酶的活性，避免组织发生自溶。 如果是培养细胞，细胞数量一定要达到 1 ×107 5. 在透射电镜样本取材时，样本不可大于 1mm3 ，并在 1 分钟以内完成固定。请问如果组 织块过大会出现什么后果？没有及时固定的组织电镜下会出现何种改变？ 由于电镜固定液戊二醛对组织的穿透能力较弱， 如果组织块过大会造成组织中心得不到及 时固定， 在电镜下没有得到及时固定组织细胞的细胞器会发生变性， 特别是对缺血乏氧十分 敏感的线粒体会出现肿胀和空泡变性等改变。 6. 扫描电镜用于观察组织表面结构，因此取材时必需要充分暴露组织表面结构，请问常用 的方法和注意事项有哪些？ 在样品取材时必须充分暴露并保护好观察面，避免损伤要观察的部位，易卷曲的样品 , 如 气管、 胃、肠粘膜可