蛋白质的通性纯化和表征.pptVIP

（2）、凝胶过滤的原理 第三十页，共57页。 （二）利用溶解度差别的分离方法 影响蛋白质溶解度的主要因素： 溶液的pH 离子强度 介电常数 温度 第三十一页，共57页。 蛋白质处于PI时，净电荷为零，相邻分子之间没有静电斥力而趋于聚集沉淀 1． 等电点沉淀和PH控制 不同蛋白质∣↓↓等电点不同∣∣ PI时溶解度最低↓将蛋白质彼此分开 第三十二页，共57页。 2．蛋白质的盐溶和盐析 中性盐对球状蛋白质的溶解度有显著影响： 盐溶——低浓度时，中性盐可以增加蛋白质的溶解度 在等电点时，中性盐K2SO4对一氧化碳血红蛋白的影响 第三十三页，共57页。 作用机理：蛋白质吸附盐类离子，带电表层使蛋白质分子彼此排斥，蛋白质与水分子的作用加强，溶解度提高。 第三十四页，共57页。 原理－－大量中性盐的加入，使水的活度降低，原来的溶液中的大部分自由水转变为盐离子的水化水。降低蛋白质极性基团与水分子间的相互作用，破坏蛋白质分子表面的水化层。 盐析－－当离子强度增加到足够高时，如饱和或半饱和程度，很多蛋白质从水溶液中沉淀出来，这种现象叫盐析。 盐析法－－分离、提纯常用方法。保持蛋白质的天然构象。（NH4)2SO4 第三十五页，共57页。 血清 半饱和硫酸铵 离心 球蛋白沉淀 血清 离心 饱和