抗生素发酵生产工艺.pptxVIP

;; 抗生素的分类;早期定义;根据化学结构和性质。如，具有四环素结构的一类化学物质为四环素类抗生素。; 抗生素的分类;生物来源;生物合成途径; 抗生素的分类;; 抗生素的分类;;微生物合成抗生素;;;;;青霉素可看成是6-氨基青霉烷酸（6-aminopenicillanic 6APA）苯乙酰衍生物。侧链基团不同，形成不同的青霉素。其中主要是青霉素G。;;青霉素是有机酸，易溶于醇、酸、醚、酯类。青霉素在水中溶解度很小，而且很快失去活性。 青霉素G的pK值为2.76，能与无机或有机碱成盐。 青霉素盐极易溶于水，几乎不溶于乙醚、氯仿、乙酸戊酯等，易溶于低级醇，略溶于乙醇、丁醇、乙酸乙酯等，而水的存在会加速溶解。 青霉素盐的稳定性与含水量和纯度相关，干燥纯品很稳定，对热也很稳定，可进行干热灭菌。 但在水中很不稳定，随温度和PH影响很大，低温下稳定，而高温下易失活。一般在PH5~7时较稳定，PH在6~6.5最稳定。 青霉素遇酸、碱和金属离子都很不稳定，发生开环、重排和降解等反应，内酯胺环破坏后，青霉素失去活性。 青霉素G类盐的理化性质交表（书P172）;;青霉素生产菌的特性;发酵条件下的生长过程;在规定时间取样，显微镜观察7个时期的形态变化，控制发酵。 1－4期为菌丝生长期，3期的菌体为适宜种子。 4－5期为生产期，生产能力最强，通过工艺措施，延长此期，获得高产。 第6期到来之前结束发酵。;;;发酵工艺过程;2、种子罐培养工艺 一级种子发酵：发芽罐，孢子萌发，形成菌丝。 培养基：葡萄糖，玉米浆，碳酸钙，玉米油，消沫剂等。 pH自然，空气流量1：3（体积比）；300-350r/min； 温度（27±1）℃, 40-50h,菌丝浓度达40%以上。 二级种子罐：繁殖罐，大量繁殖。 培养基：葡萄糖、玉米浆等。pH自然，空气流量： 1:（1-1.5）；250-280r/min；（25±1）℃。14h， 菌丝浓度40%以上，残糖1.0%左右，无杂菌，为合格种子。;3、生产罐培养工艺 三级罐：生产罐；接种量12%-15％ 培养基：花生饼粉（高温），麸质粉，玉米浆，葡萄糖，尿素，硝酸铵，硫酸钠，硫代硫酸钠，磷酸二氢钠，苯乙酰胺及消沫剂，CaCO3等 参数条件： 通气量：0.7-1.8；150-200r/min； 前60小时:pH5.7-6.3，26℃； 60小时后:pH6.3-6.6, 24℃。;操作方式：反复分批式发酵 发酵罐：100M3，装料80M3. 带放: 6-10次，间隔24h，带放量10％。 发酵时间：204h 前40小时：培养基中的主要营养物 40小时后：低速连续流加葡萄糖、氮源等，使菌半饥饿，延长合成期，提高产量。; 碳源的选择 碳源占成本12％以上，采用糖化液流加,降低成本。 糖与6APA (6-氨基青霉烷 )结合形成糖基-6APA ，影响青霉素产量。 根据残糖、pH、尾气中CO2和O2含量控制糖的流加。 葡萄糖的流加，波动范围较窄，浓度过低使抗生素合成速度减慢或停止，过高则导致呼吸活性下降，甚至引起自溶。 残糖在0.6％左右，pH开始升高时流加糖。 ;氮源的选择 玉米浆: 最好，含有多种氨基酸及其前体苯乙酸和衍生物。 补加无机氮源：硫酸铵、氨水、尿素补氮。 无机盐 无机盐：硫、磷、镁、钾等。 铁有毒，控制在30ug/ml以下。;添加前体 时期：合成阶段 种类：苯乙酸及其衍生物，苯乙酰胺、苯乙胺、苯乙酰甘氨酸等 毒性：抑制细胞生长和青霉素合成。 策略：低浓度流加 控制：保持供应速率略大于生物合成需要。;青霉菌生长适宜温度30℃，合成适宜温度25℃ 20℃，青霉素破坏少，但周期很长 变温控制，不同阶段不同温度 生长阶段：较高温度，缩短生长时间 生产阶段：适当降低温度，以利于青霉素合成 前期控制在25-26℃左右，后期降温控制24℃;合成适宜pH6.4－6.6左右，避免超过7.0 在碱性条件下不稳定，易水解 pH下降：流加CaCO3、通氨水调节或提高通气量 pH上升：流加糖或天然油脂;＜30％饱和氧浓度，产率急剧下降 ＜10％饱和氧浓度，造成不可逆的损害 临界溶氧浓度：30％ 通气比：1：0.8VVM 适宜的搅拌速度，保证气液混合，提高溶氧 根据各阶段的生长和耗氧量不同，调整搅拌转速:;临界菌体浓度：溶解氧速率和氧消耗速率达到平衡时的菌体浓度。 此浓度，则供氧不足，溶解氧下降，发酵产率下降。 发酵稳定期，湿菌浓 15%-20%,菌干重 3%-5%左右; 天然油脂：玉米油 化学消沫剂：泡敌 策略：少量多次 注意：前期不宜多加入，影响呼吸代谢。;;分离纯化工艺过程;;青霉素的存在部位：发酵液 浓度较低：仅含百分之几 含有大量杂质：菌体细胞、核酸、杂蛋白质、细胞壁多糖等、残留的培养基、色素、金属离子、代谢产物等