第六章生物合成技术.pdfVIP

生物 合成 技术 生物技术，又称生物工程或生物工程技术， 是生物科学与工程技术相结合而 形成的新学科。生物技术主要包括基因工程、蛋白质工程、细胞工程、酶工程和 发酵工程。 基因工程又称为重组 DNA技术， 是通过人工操作， 在分子水平上进行 基因重组、 改造和转移， 以获得具有新的遗传特性的细胞， 合成人们所需物质的 技术过程。 酶工程是酶的生产与应用的技术过程。 即是通过人工操作， 获得人们 所需的酶， 并通过各种方法使酶发挥其催化功能的技术过程。 细胞工程是在细胞 水平上改变细胞的遗传特性或通过大规模细胞培养以获得人们所需物质的技术 过程。发酵工程又称为微生物工程， 是在人工控制的条件下， 通过微生物的生命 活动而获得人们所需物质的技术过程。 发酵方式主要分为固体发酵和液体发酵两 大类。生物技术可以定向改造生物、加工生物材料，有目的地利用生命过程，广 泛应用于医药、农林牧渔、生态、轻工食品、化工、能源、材料、海洋开发及环 境保护等领域，涉及面广，促进传统产业的改造和新型产业的形成。 实验 1 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 一、实验目的 1. 学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞的方法。 2. 学习将外源质粒 DNA转入受体菌细胞并筛选转化体的方法。 二、实验原理 转化是将异源 DNA分子引入另一细胞品系， 使受体细胞获得新的遗传性状的 一种手段， 它是微生物遗传、 分子遗传、 基因工程等研究领域的基本实验技术之 一。 转化过程所用的受体细胞一般是限制 - 修饰系统缺陷的变异株，即不含限制 性内切酶和甲基化酶的突变株。 受体细胞经过一些特殊方法处理后， 细胞膜的通 透性发生变化， 成为能容许外源 DNA分子通过感受态细胞。 在一定条件下， 将外 源 DNA分子与感受态细胞混合保温， 使外源 DNA分子进入受体细胞。 进入细胞的 DNA分子通过复制、表达实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。 将经过转化后的细胞在选择性培养基中培养即可筛选出转化体。 本实验以 E. coli DH 5 α菌株为受体细胞，用氯化钙处理受体菌使其处于 感受态，然后在一定条件下与 pBR322质粒携带有抗氨苄青霉素和抗四环素的基 因，因而使接受了该质粒的受体菌也具有抗氨苄青霉素和抗四环素的特性， 常用 r r Amp，Tet 符号表示。将经过转化后的全部受体细胞经过适当稀释后，在含有氨 苄青霉素抗四环素的平板培养基上培养， 只有转化体才能存活， 而未受转化的受 体细胞则因无抵抗氨苄青霉素和四环素的能力都被杀死， 所有带有抗药基因的质 s s r r 粒 DNA能使受体菌从对抗菌素敏感 （Amp，Tet ）转变为具有抗药性 （Amp，Tet ）， 即表明了该质粒具有生物活性。 这种转化活性是检查质粒 DNA生物活性的重要指 标。 转化体经过进一步纯化扩增后， 再将转入的质粒 DNA分离提取出来， 可进行 重复转化、电泳、电镜观察及做限制性内切酶酶解图谱、分子杂交、 DNA测序等 实验鉴定。 为提高转化率，实验中要注意以下几个重要因素： （1）细胞生长状态和密度：不要用