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医学实验常用方法学简介; 问 题 处理方法 观察对象太小 放大 显微镜 光线不能透过观察对象 切片 观察对象缺乏反差 染色 观察对象生化成份不一样 细胞化学 免疫组织化学 观察对象为生活状态 培养;（一）光学显微镜技术 1、通常光学显微镜 2、荧光显微镜 3、相差显微镜 4、激光扫描共聚焦显微镜;（二）电子显微镜技术 1、透射电子显微镜 2、扫描电子显微镜;（三）组织化学术 1、多糖 2、脂类 3、酶 4、核酸;（四）免疫组织化学术 （五）原位杂交术 （六）细胞和细胞化学定量术 1、显微分光光度测量术 2、形态计量术 3、流式细胞术 （七）组织培养术 （八）放射自显影术;（一）光学显微镜术light microscope（LM） 1 石蜡切片 ①取材 Formalin 40%, 4% ②固定 Bouin Formalin 40% 25ml 苦味酸饱和水溶液 75ml 冰醋酸 5ml ③脱水--乙醇、包埋--石蜡 ④切片 6um ⑤脱蜡 二甲苯→乙醇 →水 ⑥染色 HE Hematoxylin: 核酸RER、 Ribosome Eosin: 蛋白、膜结构（mitochondria、 SER、lysosome） ⑦透明、封片;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;3、涂片 血涂片 精液 痰液 培养细胞 4、铺片 5、磨片 骨和牙需制成磨片、经染色后观察;;;;;;;;（二）电子显微镜技术 电子显微镜（简称电镜）发明和使用, 使组织胚胎学研究内容发生了深刻改变。光镜分辨率为0.2um, 放大倍数约为1000倍, 而电镜分辨率为0.2nm, 比光镜高1000倍, 可放大几万倍至几十万倍, 所以电镜能观察到更微细结构。在电镜下所见结构称为超微结构(ultrastructure)。; 用于观察细胞内部结构, 标本制备比光镜要求更严格, 组织块要更新鲜, 体积更小（1mm3）, 固定常见戊二醛和锇酸。切片则用超薄切片机, 制成50~80nm超薄切片, 用醋酸铀和柠檬酸铅染色, 然后在电镜下观察并摄片。;;;;;;;; 用于观察组织或细胞表面微细结构, 标本需经喷镀金属膜特殊处理, 然后在扫描电镜下观察, 在荧光屏上扫描成像, 展现富于立体感表面图像, 如细胞表面微绒毛、纤毛和细胞伸出伪足等。;;;;;;;2、荧光显微镜（fluorescence microscope） 由光源、滤光系统和显微镜三个部分组成。光源为高压汞灯, 可产生紫外光, 标本中自发荧光物质或经荧光素染色或标识结构在紫外光激发下可产生多种颜色荧光, 以此来研究该荧光物质在细胞和组织中分布。;3、相差显微镜（phase contrast microscope） 用于进行细胞培养中活细胞观察, 可使无色透明细胞镜下结构反差显著, 图像清楚。;4、激光扫描共聚焦显微镜（laser scanning confocal microscope） 是多年研制和应用一个新型显微镜。它将激光束落在样品上, 并作移动扫描, 对样品内某种荧光标识物质进行二维和三维动态微量分析测定。可用来研究活细胞内Ca2、 Na+和 K+等pH值动态改变; 细胞内多种细胞器、细胞骨架、核酸、蛋白质和受体等定位和定量分析; 细胞膜电位、膜通道及信息传输检测; 利用激光对细胞结构或染色体作切割、分离和克隆等逐步成为生物医学研究中关键研究手段。;;（三）组织化学术（histochemistry） 应用化学反应与物理反应原理检测组织或细胞内某种化学成份并进行定位、定量及相关功效研究技术。;1、多糖 显示多糖或蛋白多糖常见方法是过碘酸—雪夫反应(periodic acid Schiff reaction,PAS反应)。组织或细胞中多糖被结合形成紫红色沉淀物。此反应称PAS阳性反应, PAS阳性部位为多糖存在部位。;;;2、脂类 标本用甲醛固定, 冷冻切片, 用油红O、尼罗蓝或苏丹类染料染色, 使组织和细胞