微生物检验的基本操作技术课件.ppt

第六章 微生物检验的根本操作技术;第一节 无菌操作;;1〕在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区，接种时必须穿工作服、戴工作帽应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球将手擦干净； 2〕在操作前20～30分钟要先启动超净台和紫外灯，进行接种所用的吸管、平皿及培养基等必须经消毒灭菌，翻开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼3次后使用。严禁用手直接拿无菌物品，如瓶塞等，而必须用消毒的钳、镊子等； 3〕从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不能触及试管或平皿边；;4〕接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及翻开试管塞都要通过火焰消毒； 5〕接种环或接种针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必须时还要烧到环和针与杆的连接处； 6〕吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。倾倒平板应在超净台内操作，并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。;二、无菌操作的环境要求;1、无菌室;〔3〕无菌室使用要求;??? 2、超净工作台 超净台的使用与保养: 〔1〕风速保持在米/秒; 〔2〕使用前开启紫外灯照射30分钟以上; 〔3〕让超净台预工作10－15分钟; 〔4〕使用完毕后，用70%酒精将台面和台内四周擦拭干净. 3.无菌器材 〔1〕灭菌器材：玻璃器皿、培养基、无菌衣等； 〔2〕消毒器材：无菌室内的凳子、试管架、天平、工作台、手等。;。 〔3〕无菌间只允许放置无菌操作台、转椅、水浴锅；无菌操作台上只允许摆放以下物品： ;三、无菌操作的根本技术;无菌操作技术;无菌操作;2、微生物检验过程中的无菌操作要求;3、无菌操作技术详细图解;接种环在火焰上充分烧红〔接种柄，一边转动一边慢慢地来回通过火焰三次〕;2. 试管前端过火;4. 试管斜倾，放入接种环;5. 试管前端过火，盖上試管盖;2. 自 平板 上取单一菌落 (方法一：盖子微开遮住培养基，防止空气中菌体掉入);;1. 调整 Pipetman 刻度 (P1000 吸取范围 200 ~ 1000μl);3. 按钮压至第一段 (不可压至最底);5. 慢慢释放按钮，即可 吸取液体;1. 试管前端过火;方法一：以接种环沾菌，放入新的培养基中接菌;操作時离火源遥远;〔3〕错误示范;〔3〕错误示范;第二节、微生物的接种、别离纯化和培养技术;一、接种;划线接种法 斜面接种法 涂布接种法 液体接种法 半固体穿刺接种法 ;;平板划线别离法--分区划线别离法;;2〕、斜面接种法;斜 面 接 种 操 作;〔4〕将已灭菌的接种环伸入菌种管中，从斜面上取菌少许，迅速伸入待接种的培养基管中，在斜面底部向上划一条直线，然后从底部起向上作曲折连续划线，直至斜面上方顶端； 〔5〕取出接种环，火焰灭菌管口，塞上棉塞〔先塞内管〕；最后将接种环经火焰灭菌放好； 〔6〕做好标识，置35℃培养 箱中培养18~24小时。 斜面培养一般形成均匀一 致的菌苔。一般可观察表 面、透明度、色泽等特征。; 大肠杆菌斜面 金黄色葡萄球菌斜面;3〕稀释涂布别离法：用无菌玻璃涂棒在培养基外表轻轻地涂布均匀，然后分别倒置于37℃温箱中培养。;4〕、液体接种法〔肉汤接种〕;5〕、穿刺接种法〔半固体接种〕;;二、别离纯化; 将无菌培养皿放入生物平安柜或净化台中，然后分别倒入15ml已融化并且冷却至45℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布，待凝固之后，把这平板倒置在恒温培养箱中培养。单一细胞经过屡次增殖后形成一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述步骤数次，便可得到纯培养物。整个操作过程应严格按照无菌操作。;倒平板技术;三、微生物的培养方法;1、一般培养法〔需氧培养〕 培养温度:25~37℃ 2、厌氧培养方法 〔1〕 简易的厌氧培养法： A、 庖肉培养法 B、铁丝圈厌氧培养法 C、焦性没食子酸法 〔2〕 厌氧罐法 〔3〕 厌氧手套箱法;厌氧缸法 厌氧缸是普通的枯燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。 接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养。 厌氧罐法： 装入待培养的对象，然后密闭罐盖，接着可采用抽真空→灌氮→抽真空→灌氮→抽真空→灌混合气(N2∶CO2∶H2=80∶10∶10，V/V)。;;厌氧手套箱;3、二氧化碳培养法;二氧化碳培养法;;四、微生物常规鉴定技术 ;1.点状 2.圆形 3.丝状 4.不规那么形 5.假根状 6.纺锤状 7.扁平 8.隆起 9.凸起 10.垫状