小鼠骨髓细胞染色体制备与观察.docxVIP

实验二小鼠骨髓细胞染色体制备与观察 实验原理 A小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞 数量较多。 ? ＞秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于 增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以 收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞O nucleationfrlongaliansteady stateAv -SIEAEQ.3_aB』。一E 己一⑥一一cnqns y=3qn』^ nucleation frlongalian steady state Av -SIEAEQ.3_aB』。一E 己一⑥一一cnqns y=3qn』^ growing microtubule microl ubule wil li a subunirs coming on anti off individual suburiis； ? 8 蜡—一 time at 37 fC . 1- ■期 1KE3嘴 产二 拒鹑磷湄一/ ?M仁分酝 rP4TSK 株校营 W心#分 fFJr*W 部性的坂 蛙毋新唯W L旧期 ?ft￡.爪 由单中核 投54*盅 靖|魅碰 钎罐落! 部为月 姓庵禹桁俱: 亚制珍皈?核岐恐 teatf? 可松 =3险铿眈 牲醒夏坦制驼 魂 站侦样HL 核被映解体 未削 讨演虽自林殖 JA箱的氓整田 威触平败怵表鞍堡 相* 3.中削 整怦?用 在泰iH4g 却粒探竹 些能许 ,染色惦做君泮13阙 W聘切努袈 牌J^F哀:西.产— 少:Rf子演魄 如嫁聚哲体的 i i，鹿卷井巾 1?地开M tAM出 1 fdijfc 探折药 Fft? K 山做:I*叫足 也的曾?!为 段传歧拿 SI中心％项Slit W ? JF1 ■实验目的与要求: 熟悉小鼠骨髓细胞染色体制备方法。 了解小鼠染色体核型。 认识秋水仙素对细胞增殖的作用o ■器材与试剂 ■内容与方法 （一）小鼠骨髓细胞染色体制备 预处理一＞ 取材，收集细胞一＞ 低渗 染色滴片 固定、再固定 *取材前2?3h,向腹腔 内注射秋水仙素。注射 浓度随动物种类不同而 异。秋水仙素的主要作 用是使分裂细胞阻断在 有丝分裂中期，增加中 期分裂相的比例。 腹腔内注射秋水仙素2?3小时后，颈椎脱臼 处死小鼠o 小白鼠骨骼标本 Fo-^a capitis 3血 frm。俾k / \ V ?计头 ^^Caput 以他 temars A tt 子 Trwhsrktef rnejr troehw^efica intmodmE 而 Colluin o￡k ffimodg 小传子 冒 ?^.Tr?rtsnrter mlna* \其.于回靖 Cnsts inwrT^cc^arrt-erca \ ?r m si ?Tuberositas gluti poc tinea —Carpus osfiiS fftrnwis 内削麝 LaCTum med 外IN鲜 Labum later ale TubetcuiyrAaddiKMrium W IW fli Lfw in ter cel dylans 外上牌 ,ERc*ondg^ htxraiis ,卜 上 解 Epie(xidy1us I削(taRfi— yEpicondyluameriialis Facies 口inwllwii 、、?. ?间窝 、、Fsm htercondyterls 而 股骨 The femur 取出小鼠的后肢股骨，注意不要将股骨剪断, 否则容易造成骨髓细胞的流失O 用纱布擦股骨上的肌肉组织，清除干净 注射器抽取生理盐水冲洗骨髓 收集细胞: A暴露骨髓腔, ＞反复冲洗骨髓腔获得 骨髓细胞， ＞收集到离心管中， ＞定容至6ml. 滴片:?滴2~3滴于玻片上，吹气,A 滴片: ?滴2~3滴于玻片上，吹气, A在酒精灯火焰过火8次, ?做记号，凉干，染色 滴片后，将片子侵入Giemsa染液缸中，10?15分 钟，弃去染液，水洗，晾干，镜检。 n n An fin an 2 3 4 s nn nn nn nn 7 8 9 10 on n fl An tin 12 13 14 15 ft ft An A A nn 17 18 19 XX fin n n An ft A 16 小白Bl染色体核型 * r human  mouse 作业与思考题 ■ 1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染 色体中期分裂相。 2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液各 起什么作用？ 3、简述实验中应注意那些关键问题？ （二）染色体标本片观察 1.标本片质量评价 （1） 细胞密度合适、均匀； （2） 背景干净，细胞核和染色体清晰; 凌..％ 细胞密度 染色体 分散度 2.染色体形态特征观察 3.染色体计数 (100X10) 4.细胞增殖指数统计 细胞增殖指数二 X100