GC脂肪酸分析MIDI试剂准备和抽提步骤...docVIP

GC脂肪酸剖析MIDI试剂的准备和抽提步骤.. GC脂肪酸剖析MIDI试剂的准备和抽提步骤.. PAGE / NUMPAGES GC脂肪酸剖析MIDI试剂的准备和抽提步骤.. TSBA培育基是针对嗜氧菌 (TSBA Media for Aerobes: TSBA6 数据库 ) Trypticase Soy Broth Agar(TSBA) 培育基是嗜氧菌标准的培育基。利用以下的配方 作为 TSBA培育基。供货商被建议在附带数据 (Appendix A) 中。 混淆在 2 升的锥形瓶 Trypticase soy broth 30 grams Granulated agar 15 grams Distilled Water 1 liter 加热并搅拌至完整混淆和琼脂 (Agar) 完整溶解 在温度 121 度及 15psi 下高压灭菌 15 分钟 注意事项：不行过分加热培育基，使用高压灭菌器须有温度实时间的设定装置。 在水浴中冷却至 60 度 加 20-25 ml 在溶解的琼脂 (Agar) 分装至无菌 100 x 15mm 直径的培育皿中，琼脂须有 2.5-3.2mm 深。 同意琼脂在室温下凝结，但假如培育基想储藏一段时间，一定在 24 小时内包装在无菌 装置中。它们能够保留在冷藏中直到使用。 注意事项——对于商业化已备好的 TSBA培育基： TSBA能够从 BBL购置，但需要指定货号，见附带数据 (Appendix A) 。使用其余供应商供应的 TSBA培育基可能会致使结果不一致，用户需要用 ATCC菌株考证培育基能否成效相当。 1 试剂的准备 (Reagent Preparation) 四种试剂要求是皂化细胞， 脂化， 萃取和基本清洗脂肪酸的萃取物。 试剂应准备在干 净，棕色及可标示一公升的瓶子。 搁置一个 Teflon-coated 搅动台在每个瓶子上去增添在混 合时。只有 Teflon 和玻璃能够接触到试剂。瓶子能够从头使用不须要从头浸润。自动分注 的增添备置速度可是一定准备和确立适合的操作在每批样品使用前。 确认分注试剂使用分注 试剂在有刻度的量筒以达到校订成效。 以下的配方准备试剂约够 300 个样品或许能够在先前 调整以够配合实验室的样品量，试剂准备用 VPI Anaerobe Method 和数据库在 Appendix B 中。 注意事项 : 试剂 1 和 4 是腐化性和试剂 2 是酸性的全程配戴安全眼镜及手套， hexane 及 methyl-tert-butyl ether (MTBE)在试剂 3 是可燃性的。熄灭全部的火焰或热源在使用前操作在一 个化学性的抽气风盖之下。 试剂 1- 皂化试剂 (Ragent 1: Saponification Reagent) Sodium hydroxide (certified ACS) 45 grams Methanol (HPLC grade) 150ml Deionized distilled water 150ml 混淆水和 methanol 加入 NaoH小球到溶剂中同时搅拌至锭剂完整溶解 试剂 2- 甲基化试剂 (Reagent 2: Methylation Reagent) 6.00N Hydrochloric Acid 325ml Methanol (HPLC grade ) 275ml 加酸液至 methanol 中搅拌 注意事项 : 盐酸(Hydrochloric Acid) 一定有保证浓缩。只有盐酸运送在玻璃瓶中是被同意的，和你的供应商议论包装的信息，请参照供应的建议在 Appendix A 假如 6.00N HCI 没法获得资询你的制造商标示浓度在那批号上确认最后 6.00N 的溶液滴定对照一个标准基础溶液。 试剂 3- 萃取溶剂 (Reagent 3: Extraction Solvent) Hexane (HPLC Grade ) 200ml 2 Methyl tert-buty1 ether (HPLC Grade) 200ml 加入 MTBE 在 hexane 中并搅拌平均 试剂 4- 碱清洗 (Reagent 4: Base Wash) Sodium hydroxide (Certified ACS) 10.8g Deionized distilled water 900ml 加入 NaOH在水中同时搅拌至完整溶解 额外的试剂 (Additional Reagents) Saturated NaCl: 溶解 40g 的 ACS NaCl 在 100ml 的去离子水中 试剂的保留及有效限期 (Reagent Storage and Shelf Life) 建议每 30 天泡制新的试剂。 可在瓶中保留在室温下使用 Teflo