高效液相色谱法.pptVIP

* 第六节 化合键合色谱法 枯燥活化等处理，然后再使硅胶外表上的硅羟基与各种有机物或有机硅化合物起反响，制备化学键合固定相。键合相可分为四种键型： 〔1〕硅酸酯型〔=Si-O-C=〕键合相 将醇与硅胶外表的羟基进行酯化反响，在硅胶外表形成〔=Si-O-C=〕键合相。反响生成单分子层键合相。一般用极性小的溶剂洗脱，别离极性化合物。 〔2〕硅氮型〔=Si-N=〕键合相 如果用SOCl2将硅胶外表的羟基先转化成卤素〔氯化〕，再与各种有机胺反响，可以得到各种不同极性基因的键合相。 谢谢欣赏 2021-5-18 * 第六节 化合键合色谱法 可用非极性或强极性的溶剂作为流动相。 〔3〕硅碳型〔=Si-C=〕键合相 将硅胶外表氯化后，使Si-Cl键转化为Si-C键。在这类固定相中，有机基团直接键合在硅胶外表上。 〔4〕硅氧烷型〔=Si-O-Si-C=〕键合相 将硅胶与有机氯硅烷或烷氧基硅烷反响制备。这类键合相具有相当的耐热性和化学稳定性，是目前应用最为广泛的键合相。 谢谢欣赏 2021-5-18 * 第六节 化合键合色谱法 二、反相键合相色谱法 在反相色谱中，一般采用非极性键合固定相，如硅胶-C18H37〔简称O D S或C18〕硅胶-苯基等，用强极性的溶剂为流动相，如甲醇/水，乙腈/水，水和无机盐的缓冲液等。 目前，对于反相色谱的保存机制还没有一致的看法，大致有两种观点：一种认为属于分配色谱，另一种认为属于吸附色谱。 分配色谱的作用机制是假设混合溶剂〔水+有机溶剂〕中极性弱的有机溶剂吸附于非极性烷基配合基外表，组分分子在流动相中与被非极性烷基配合基所吸附的液相中进行分 谢谢欣赏 2021-5-18 * 第六节 化合键合色谱法 配。 吸附色谱的作用机制是把非极性的烷基键合相，看作是在硅胶外表上覆盖了一层键合的十八烷基的“分子毛〞，这种“分子毛〞有强的疏水特性。当用水与有机溶剂所组成的极性溶剂为流动相来别离有机化合物时，一方面，非极性组分分子或组分分子的非极性局部，由于疏溶剂的作用，将会从水中被“挤〞出来，与固定相上的疏水烷基之间产生缔合作用。另一方面，被别离物的极性局部受到极性流动相的作用，使它离开固定相，减少保存值，此即解缔过程。显然，这两种作用力之差，决定了分子在色谱中的保存行为。 一般地，固定相的烷基配合基或别离分子中非极性局部 谢谢欣赏 2021-5-18 * 第六节 化合键合色谱法 的外表积越大，或者流动相外表张力及介电常数越大，那么缔合作用越强，分配比也越大，保存值越大。 在反相键合相色谱中，极性大的组分先流出，极性小的组分后流出。 三、正相键合色谱法 在正相色谱中，一般采用极性键合固定相，硅胶外表键合的是极性的有机基团，键合相的名称由键合上去的基团而定。最常用的有氰基〔-C N〕、氨基〔-NH2〕、二醇基〔DIOL〕键合相。流动相一般用比键合相极性小的非极性或弱极性有机溶剂，如烃类溶剂，或其中参加一定量的极性 谢谢欣赏 2021-5-18 谢谢观赏 谢谢观赏 * 高效液相色谱法 上海交通大学医学院 李 莉讲师 谢谢欣赏 2021-5-18 *  第一节 概 述 高效液相色谱法是继气相色谱之后，70年代初期开展起来的一种以液体做流动相的新色谱技术。 高效液相色谱是在气相色谱和经典色谱的根底上开展起来的。现代液相色谱和经典液相色谱没有本质的区别。不同点仅仅是现代液相色谱比经典液相色谱有较高的效率 和实现了自动化 操作。经典的液相色谱法，流动相在常压下输送，所用的固定相柱效低，分析周期长。而现代液相色谱法引用了气相色谱的理论，流动相改为高压输送〔最高输送压力可达4.9?107Paaa〕;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱〔每米塔板数可达几万或几十万〕；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流 谢谢欣赏 2021-5-18 * 第一节 概 述 出物进行连续检测。因此，高效液相色谱具有分析速度快、别离效能高、自动化等特点。所以人们称它为高压、高速、高效或现代液相色谱法。 二、液相色谱别离原理及分类 和气相色谱一样，液相色谱别离系统也由两相——固定相和流动相组成。液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键合固定相〔或在惰性载体外表涂上一层液膜〕、离子交换树脂或多孔性凝胶；流动相是各种溶剂。被别离混合物由流动相液体推动进入色谱柱。根据各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异进行别离。色谱别离的实质