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微生物转化的发展： ◎20世纪40年代，微生物转化领域的研究蓬勃兴起 ◎首先在甾体转化方面取得巨大成功，并建立了工业规模的甾体激素转化操作 ◎微生物转化在其他种类生理活性化合物如生物碱、抗生素、大麻油和前列腺素合成上也得以应用。 9.2.1 微生物转化一般过程 （1）制备培养系统（催化剂） （2）加入底物 （3）加入效应物（抑制剂或激活剂） （4）保温反应 （5）监测反应过程 （6）终止反应 （7）产物分离 9.2.2 培养系统类型 （1）分批培养：培养基的准备、接种、细胞培养、底物加入、保温直至反应完成。 （2）连续培养：连续加入新鲜培养基和等速率移去消耗了的培养基，使细胞在相对长的周期内维持稳定状态。 9.2.2 培养系统类型 （3）静息细胞（有生命的、不生长的细胞，保持许多酶的活性）：可自由改变反应液中底物和菌体的比例，反应时间较短，转化生成物中杂质较少，因而分离提纯容易。 （4）干细胞：冻干或丙酮处理。 用干细胞粉的方法与用新鲜静息细胞相同，但干粉保藏和运输方便。 9.2.2 培养系统类型 （5）孢子：悬浮在培养基中的孢子能用作生物转化活性相对稳定的来源。方法类似于静息细胞的方法。 （6）渗透细胞：用表面活性剂或溶剂处理细胞，改变细胞渗透性。 如加入青霉素提高细胞渗透性。 注意：可能因渗透性的改变而影响细胞的生存 9.2.2 培养系统类型 （7）固定化细胞：可以保持活性几个月，比静息细胞催化寿命长，而且可以建立连续转化系统。 （8）渗透交联固定化细胞：先用某些试剂（多为表面活性剂）处理细胞，提高细胞通透性；然后再进行交联固定化。 保证酶活力破坏较小，又减少了传质阻力。 9.2.3 底物加入 ★水溶性底物 简单，考虑的是加入的时间和量 ★非水溶性底物 细小粉末； 溶在与水互溶的有机溶剂（常用的有乙醇、丙酮、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜）中； 用表面活性剂来分散不溶性物质 9.2.4 微生物转化的类型 氧化 还原 氨基化 乙酰化和去乙酰化 脱氢形成双键 腈转化成酸 光学专一和立体专一性转化与拆分 9.2.5 微生物转化的应用 （1）甾体转化 （2）β-内酰胺类抗生素 （3）维生素 （4）氨基酸 （5）生物碱 （6）其他药物 （7）化学制品 9.3 非水相酶催化 传统观点：酶只有在水相中才有活性。 20世纪80年代：美国MIT的Klibanov等 用脂肪酶粉或其固定化酶在几乎无水的有机溶剂中成功地催化合成了肽、手性的醇、酯和酰胺。 有机相酶催化反应研究蓬勃兴起 9.3.1 非水相酶催化的特性 （1）增加非极性基质的溶解度； （2）使某些原本在水相不能进行的反应顺利进行，如肽的合成、酯的合成等； （3）可减少在水相容易发生的副反应，如酸酐的水解、卤化物的水解等； （4）容易分离回收； （5）无微生物污染； 缺点：酶的活性比水相中低 9.3.2 非水相酶催化的相关问题 ★在完全无水的情况下，酶是无活性的，极少量的水就会激发酶的活性； ★有机溶剂可能直接与酶分子水合层中的必须水发生反应，影响酶的结构和功能，尤其是极性较强的溶剂，它可以溶解大量的水，将酶分子水合层中的必须水剥离掉，导致酶失活，相对来讲，憎水性溶剂对水的溶解能力较低，故对酶活和结构影响较小。 9.3.2 非水相酶催化的相关问题 ★有机溶剂在非水相酶催化中是一个相当重要的因素。Lanne等提出了用溶剂极性参数lgP（P为溶剂在正辛醇和水双相体系中的分配系数）来描述溶剂极性与酶活的关系。 ★有机相酶反应中，酶可以游离形式直接反应，或固定化在诸如玻璃珠等固体多孔物质上。另外可采用共价修饰（PEG）等方法使酶能溶解在有机溶剂中。 9.3.3 非水相酶催化的应用 （1）酯的合成和醇、酸、酯的拆分 （2）肽的合成和应用 第十章 动物细胞培养 10.1 动物细胞培养的定义和意义 在体外培养动物细胞的技术，即在无菌条件下，从机体中取出组织或细胞，或利用已经建立的动物细胞系，模拟机体内的正常生理状态下生存的基本条件，让细胞在培养容器中生存、生长和繁殖的方法。 动物细胞培养的定义： 与细胞培养密切相关的技术还有组织培养和器官培养。 组织培养：动物组织在体外条件下的保存或生长，此时可能有组织分化，并保持组织的结构和功能。 器官培养：器官的胚芽、整个器官或器官的一部分在体外条件下的保存或生长，此时也能有器官的分化，并保持器官的三维立体结构和功能。 动物细胞与微生物细胞相比的不同之处： （1）动物细胞比微生物细胞大，无细胞壁 （2）倍增时间长，生长缓慢，易受污