核酸提取及常见问题.pptVIP

* 文档如有侵权，请联系本人协改正删除，内容如有不当之处，请联系本人改正或者删除，谢谢。 核酸提取及常见问题 基因组DNA－ CTAB法 　CTAB法原理（植物DNA提取经典方法） CTAB（hexadecyltrimethylammonium bromide, 十六烷基三甲基溴化铵）, 是一个阳离子去污剂, 可溶解细胞膜, 并与核酸形成复合物。 该复合物在高盐溶液中（0.7mol/L NaCl）是可溶, 经过有机溶剂抽提, 去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。 注: CTAB溶液在低于15℃ 时会形成沉淀析出, 所以在将其加入冰凉 植物材料之前必需预热, 且离心时温度不要低于15℃。 　CTAB提取缓冲液经典配方 组份 Tris-HCl （pH8.0） 　EDTA （pH8.0） NaCl CTAB β-巯基乙醇 终浓度 100 mM 20 mM 1.4M 2%(W/V) 0.1%（V/V）使用前加入 Tris-HCl （pH8.0）提供一个缓冲环境, 预防核酸被破坏; EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子, 抑制DNase活性; NaCl 提供一个高盐环境, 使DNP充足溶解, 存在于液相中; CTAB溶解细胞膜, 并结合核酸, 使核酸便于分离; β-巯基乙醇是抗氧化剂, 有效地预防酚氧化成醌, 避