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微生物实验 实验七 测定细菌生长曲线 一、 实验目的 1. 了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时； 2. 学习液体培养基的配制以及接种方法； 3. 反复练习无菌操作技术； 4. 了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同； 5. 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法 二、 实验原理 将一定量的细菌接种在液体培养基内， 在一定条件下培养， 可观察到细菌的生长繁 殖有一定的规律性， 如以细菌的活菌数的对数作纵坐标， 以培养时间作横坐标， 可绘成 一条曲线，成为生长曲线（如图一） 。 图一 微生物生长曲线示意图 单细胞微生物的发酵具有四个阶段，即Ⅰ调整期（延滞期） 、Ⅱ对数期（生长旺盛 期）、Ⅲ平衡期（稳定期） 、Ⅳ死亡期（衰亡期） 。 生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程的动态。 不同的微生物有不同的生 长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下， 其生长曲线也不一样。因此， 测定微生物 的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。 测定微生物生长曲线的方法很多， 有血球计数板法、 平板菌落计数法、 称重法和比 浊法等。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可利用 分光光度计测定细菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。将所测得的光密度值（ OD600） 与其对应的培养时间作图， 即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。 注意， 由于光密度 表示的是培养液中的总菌数， 包括活菌与死菌， 因此所测定的生长曲线的衰亡期不明显。 从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以 G 表示。其 计算公式为： t2 t 1 G (lg W lgW ) / lg 2 2 1 式中 t1 和 t2 为所取对数期两点的时间； W1 和 W2 分别为相应时间测得的细胞含量（ g/L ）或 OD。 三、 实验仪器、材料和用具 1. 实验材料 :大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板； 2. 培养基 :牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基 微生物实验 3. 实验仪器 :取液器 (5000ul, 1000ul 各一支 );培养箱 , 摇床， 722s 分光光度计； 4. 实验用具 :无菌 1000ul 吸头 80 个;无菌 5000ul 吸头 2 个 ;比色皿 9 个 +共用参比杯一个 . 四、 实验步骤 1. 准备菌种：将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中， 37℃振荡培养 18h，另 外准备单菌落平板各 1 块 2. 分为三个小组： 第（ 1）小组 取 1.0ml 大肠杆菌菌液接种到 100ml 培养基 , 37 ℃ 200rpm 取 3.0ml 大肠杆菌菌液接种到 100ml 培养基， 37 ℃ 20