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实验九甲醛滴定法测定氨基酸 实验九甲醛滴定法测定氨基酸 PAGE 实验九甲醛滴定法测定氨基酸 实验九 甲醛滴定法测定氨基酸 一、目的 掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点。 二、原理 氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡： H3N+—R—COO—H2N—R—COO—+H+ -NH是弱酸，，完全解离时pH为11～12或更高，若用碱滴定-NH所释放的H+来测量氨基酸，一般指示剂变色域小于10，很难准确指示终点。 常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使-NH释放H+，使溶液的酸度增加，滴定终点移至酚酞的变色域内左右)。因此，可用酚酞作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定。 R-CH(COO—)-NHR-CH(COO—)-NH2+H+中和 R-CH(COO—)-NH2R-CH(COO—)-NHCH2OHR-CH(COO—)-N(CH2OH)2 如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算出氨基氮的含量（脯氨酸与甲醛作用生成不稳定的化合物，使滴定mL数偏低。酪氨酸的滴定mL数偏高）。如样品是多种氨基酸的混合物，如蛋白水解液，则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。但此法简便快速，常用来测定蛋白质的水解程度。随水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加时，表示水解作用已完全。 三、器材药 25 mL锥形瓶；3 mL微量滴定管；吸管； mol／L标准甘氨酸溶液300 mL 准确称取750 mg甘氨酸，溶解后定容至100 mL； m01／L标准氢氧化钠溶液500 mL；（标准氢氧化钠溶液应在使用前标定，并在密闭瓶中保存。不可使用隔日贮在微量滴定管中的剩余氢氧化钠。） 酚酞指示剂20 mL ％酚酞的50％乙醇溶液 中性甲醛溶液400mL 在50 mL 36～37％分析纯甲醛溶液中加入1 mL ％酚酞乙醇水溶液，用 mol／L的氢氧化钠溶液滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中。此试剂在临用前配制。如已放置一段时间，则使用前需重新中和。 四、操作 1．取3个25 mL的锥形瓶，编号。向第1、2号瓶内各加入 mo1／L的标准甘氨酸溶液和5 mL水，混匀。向3号瓶内加入7mL水。然后向3个瓶中各加入5滴酚酞指示剂，混匀后各加2 mL甲醛溶液，再混匀，分别用 mo1／L标准氢氧化钠溶液滴定至溶液显微红色。 重复以上实验2次，记录每次每瓶消耗标准氢氧化钠溶液的mL数。取平均值，计算甘氨酸氨基氮的回收率。 甘氨酸氨基氮回收率％=×100 公式中实际测得量为滴定第1和2号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液mL数的平均值与3号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液mL数之差乘以标准氢氧化钠的摩尔浓度，再乘以。2mL乘以标准甘氨酸的摩尔浓度再乘。即为加入理论量的mg数。 2．取未知浓度的甘氨酸溶液2 mL，依上述方法进行测定，平行做几份，取平均值。计算每mL甘氨酸溶液中含有氨基氮的mg数。 氨基氮(mg／mL)= 式中：A为滴定待测液耗用标准氢氧化钠溶液的平均mL数。 B为滴定对照液(3号瓶)耗用标准氢氧化钠溶液的平均mL数。mo1／LNaOH为标准氢氧化钠溶液的真实摩尔浓度。 思 考 题 选用酚酞指示剂，为什么滴定的是氨基? 注意事项 本实验为定量实验，甘氨酸和氢氧化钠的浓度要严格标定，加量要准确，全部操作要按分析化学要求进行。