临床检验技师临床免疫学和免疫检验抗原抗体反应讲义.pdfVIP

第二章 抗原抗体反应 第一节 抗原抗体反应的原理 抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原决定簇（表位）和抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性， 这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的。 除两者分子构型高度互补外，抗原表位和抗体超变区必须密切接触，才有足够的结合力。 一、抗原抗体结合力 抗原抗体是一种非共价结合，不形成共价键。 1. 静电引力（库伦引力） ：是因抗原、抗体带有相反电荷的氨基与羧基基团间相互吸引的能力，这种 吸引力的大小和两个电荷间的距离平方成反比。两个电荷距离越近，静电引力越大。 2. 范德华力 ：这是原子与原子、分子与分子相互接近时分子极化作用发生的一种吸引力，是抗原、抗 体两个大分子外层轨道上电子相互作用时，两者电子云中的偶极摆动而产生的引力。这种引力的能量小于 静电引力。 3. 氢键结合力 ：是供氢体上的氢原子与受氢体上氢原子间的引力。其结合力较强于范德华引力。 4. 疏水作用：最强。 水溶液中两个疏水基团相互接触，由于对水分子的排斥而趋向聚集的力。 二、抗原抗体的亲和性和亲合力 亲和性指抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原表位之间相适应而存在的引力，它是抗原抗体间固 有的结合力。亲和性用平衡常数 K 来表示， K 值越大，亲和性越强 ，与抗原结合也越牢固。 抗体的亲合力指抗体结合部位与抗原表位间结合的强度，与抗体结合价、抗体的亲和性、抗原有效表 位数目等相关。 三、亲水胶体转化为疏水胶体 抗体和大多数的抗原同属蛋白质，在通常的血清学反应条件下带有 负电荷 ，形成水化层，成为新水胶 体，因此，蛋白质分子不会相互凝集或沉淀。 当抗原与抗体结合，使其表面电荷减少，水化层变薄，失去亲水性能，抗原抗体复合物成为疏水胶体。 在电解质作用下，胶体粒子表面的电荷被中和，使疏水胶体进一步靠拢，形成可见的抗原抗体复合物。 第二节 抗原抗体反应的特点 一、特异性 抗原表位与抗体超变区结合的特异性，是两者在化学结构和空间构型上呈互补关系所决定的。这一特 性，是应用于临床诊断的基础。 但某些天然抗原具有多种抗原表位，与另一物质可能有共同抗原表位，对检验结果产生交叉反应。 二、可逆性 抗原抗体是非共价结合，故不牢固，是一种动态平衡过程。抗原抗体的亲合力及反应条件（如离子强 度、 pH 等）可影响解离。 亲和层析法就是利用这个原理来纯化抗原或抗体。 三、比例性 抗原抗体比例合适时，沉淀物形成快而多，称为抗原抗体反应的等价带；若抗原或抗体极度过剩则无 沉淀形成，称为带现象，抗体过量时，称为前带，抗原过量时，称为后带。 第 1 页 四、阶段性 抗原抗体反应可分为两个阶段。 第一阶段：抗原与抗体特异性结合阶段，此阶段仅需几秒至几分钟，但不出现可见反应。 第二阶段：可见反应阶段，此阶段需要数分钟至数小时。 反应过程受到反应条件（如温度、 pH、电解质、抗原抗体比例等）的影响。 第三节 影响抗原抗体反应的因素 一、反应物自身因素 1. 抗体：浓度、特异性、亲和性和等价带的宽窄都影响抗原抗体反应。 应选择高特异性、高亲合力的抗体作为诊断试剂。但 单克隆抗体不适用于沉淀反应 。 2. 抗原：理化性状、分子量、抗原表位的种类及数目均可影响反应结果。 颗粒性抗原出现凝集反应，可溶性抗原出现沉淀反应，单价抗原与相应抗体结合不出现沉淀现象。 二、环境因素 1. 电解质：抗原抗体反应时常用 0.85%NaCl 或各种缓冲液作为抗原及抗体的稀释液。 2. 酸碱度：抗原抗体反应一般在 pH6～9 之间进行。 3. 温度： 一般为 15～40℃，常用反应温度为 37℃，如高于 56℃，可导致已结合的抗原抗体解离，甚至 变性或破坏。 4. 振荡：适当振荡也可加速反应。 第四节 免疫学检测技术的类型 免疫学检测技术的基础是抗原抗体反应。 早期包括：凝集现象、沉淀现象、溶