《实验三通》课件.ppt

一、物理因素对细菌的影响 (1.5学时) 1.高压蒸汽灭菌法（两个实验室一台） 2.紫外线杀菌实验（普通平板：4个） 二、肠道致病菌的鉴定(2.5学时) 1.双糖铁培养基：8个 2.玻片凝集实验：每人一张 3.革兰染色：每人一张 三、药敏实验(1学时) 示教 介绍及展示示教平板 ;;;1.高压蒸汽灭菌法;使用方法： ①加水至锅内达规定的水平面，放入欲灭菌物品，以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺旋，使锅盖均匀密闭。 ②用电炉加热，同时打开排气阀门，使冷空气逸出。待冷空气全部排出后，关闭排气阀。 ③继续加热注视压力表，器内压力又逐渐升高，直到压力表指在所需数字即调节热源，维持15～20min． ④停止加热，待压力自行下降至零时方可徐徐开放排气阀，排尽余气，打开锅盖，取出灭菌物品。;全自动高压蒸汽灭菌锅 ;注意事项： 锅内物品不宜过紧。 注意排出冷气，否则气压表虽已达15磅，温度达不到121.3℃，不能保证灭菌效果。 灭菌后排气不能过急，以免容器内液体外溢或引起破裂。 不耐高热高压之物品，不能用此法。;紫外线杀菌作用强，而穿透能力弱。 紫外线中波长265-266nm的杀菌作用最强。 杀菌机制：引起DNA链上相邻的胸腺嘧啶形成二聚体，从而干扰DNA的复制和转录，导致细菌死亡。; 方法:（每个实验室4个培养皿） ;密涂接种 ;二、肠道致病菌的鉴定;病原菌的检验程序;一、糖发酵试验;1、确定细菌是否生长。 2、产酸，则培养基指示剂（溴甲酚紫）变为黄色，以“+” 表示。 3、产酸又产气，则培养基除变黄外，在倒置的小管中有气泡，用“　　”表示。 4、不发酵糖类，培养基仍为紫色，小管内无气泡，以“-”表示。 ;;二、硫化氢产生试验 ;[结果];双糖铁培养基;双糖铁培养基的用途 用于观察细菌对葡萄糖及乳糖的发酵 能力（产酸产气）。 用于观察细菌是否产生硫化氢。;大肠杆菌发酵乳糖和葡萄糖产酸产气（糖发酵试验）,斜面及低层均呈黄色并有气泡。 沙门菌和志贺菌只发酵葡萄糖,不发酵乳糖,分解葡萄 糖产的酸使培养基PH下降,酚红指示剂变黄,但是培养 基中的葡萄糖仅有0.1%,斜面的酸性物质被氧化成 挥发性酸,且??菌氧化氨基酸物质产生的氨的中和作 用,斜面变红,而底层则为黄色。 细菌分解含硫氨基酸生成的硫化氢可以和FeSO4反应生成FeS黑色沉淀。 ; 双糖铁培养基上细菌的生长现象 ;Double suger iron slant; 1.标本的采集 粪便标本 SS培养基 2.分离培养 观察菌落特点 革兰染色(形态学鉴定) SS平板 接种双糖铁培养基（生化反应） 玻片凝集试验（血清学鉴定） ;一、观察上次实验内容 ;方法：穿刺+斜面 接种针挑取单个菌落，沿培养基中心垂直插入至距离管底0.5cm处，原路退出。 接种环挑取单个菌落，自斜面底部向上划一直线，然后再从斜面底部向上轻轻来回作蜿蜒划线。 培养18-24小时，观察结果并分析。 注意：1. 应在菌落稀疏部位挑取单个菌落。 2. 穿刺和斜面接种原则上应为同一个菌落。 3. 不同的小组可以选择不同颜色的菌落来接种。;三、玻片凝集试验;方法： 1.取清洁玻片一张，用记号笔划分成两部分。用加样器分别在两边加沙门菌属多价O血清7微升。 2.无菌操作下用接种环挑取SS平板上菌落（黑色菌落，粉红色大菌落）与血清混合研磨成均匀乳状。 3.轻轻摇动玻片，经1～2min后观察结果。; 注意事项： 注意涂菌时，需要标明菌落，以免混淆导致错误判断。 摇动玻片时要小心，不要使液体流到手上。 实验结束将玻片放入玻片缸内，切勿任意放置或冲洗。 ;四、挑取可疑菌落进行革兰染色;五、结果判断;操作内容;药 敏 试 验;目的：;原理：; 主要材料：;方法：;1.标记分区;2.密涂接种;3.贴片 ;4.培养 ;;6.注意事项;实验报告;下周实验内容