专题十 生物技术在食品加工及其他方面的应用.pptxVIP

专题十：生物技术在食品加工及其他方面的应用;;;一、基础知识;3、DNA的溶解性;①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？;DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离;7、DNA的鉴定;二、实验设计;动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水 ，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可;①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜;答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等;讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？;（四） DNA的析出与鉴定;DNA的鉴定;2、 DNA的鉴定;2.实验操作步骤中三次过滤的比较;专题五;1．DNA复制的条件 (1)DNA复制的条件;知识贴士 DNA复制需要引物的原因：DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3′端延伸DNA链。;2．PCR技术 PCR技术利用了DNA的热变性原理：在80～100℃的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开；当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链。 PCR反应的条件;知识贴士 PCR需要适宜但不同于细胞内DNA复制的条件，比如不需要添加解旋酶，不需要添加ATP，但需要添加耐热的DNA聚合酶、引物以及能够人为控制温度和复制周期等。;如下图所示：;1．理论上DNA呈指数方式扩增。若开始只有一个DNA提供模板，则循环n次后有2n个；若开始有N0个DNA提供模板，则循环n次后获得的子代DNA数目为N0·2n个。 2．DNA含量的测定： DNA在260nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰，峰值的大小与DNA含量有关。可以利用DNA的这一特点进行DNA含量的测定，具体方法如下：;知识贴士 PCR扩增过程中的易错点 ①PCR过程中无解旋酶，破坏氢键需要升高温度才能打开氢键，但此时的温度还不能破坏磷酸二酯键，因此，热变性后是DNA单链，并未分解成单体。 ②复性时只是在引物和DNA单链之间形成氢键，两条单链之间并未形成氢键，因此复性后，无双链DNA分子形成。;课题3　血红蛋白的提取和分离;;;;1.凝胶色谱法——血红蛋白的分离方法: (1)概念:根据_____________的大小分离蛋白质的有效方法,也 称做___________。; ②分离原理: _________________的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程 _____,移动速度较慢,通过凝胶的时间_____；_____________ _____的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在凝胶外部移动, 路程_____,移动速度较快,通过凝胶的时间_____。;;;;;;;;; ;影响蛋白质分子运动速度的因素;（3）分类： ;琼脂糖凝胶电泳; SDS--聚丙烯酰胺凝胶电泳 ;思考：凝胶色谱法和电泳法在实现蛋白质分离的原理方面有何不同？;二、实验操作;1.红细胞的洗涤: ①目的:___________。 ②方法:;2.血红蛋白的释放：;思考：红细胞破碎混合液中不仅含有血红蛋白,还含有细胞破碎物、甲苯等有机溶剂，怎样除去这些杂质呢? ;思考：红细胞破碎混合液中不仅含有血红蛋白,还含有细胞破碎物、甲苯等有机溶剂，怎样除去这些杂质呢? 提示：红细胞破碎混合液→高速长时离心(2 000 r/min× 10 min)→滤纸过滤分离出血红蛋白。;3.分离血红蛋白溶液: 离心后试管中的溶液分为4层,从上往下依次为: 第1层:无色透明的_______。 第2层:脂溶性物质的_______——白色薄层固体。 第3层:血红蛋白的水溶液——_____透明液体。 第4层:其他杂质的暗红色沉淀物。 将试管中液体用_____过滤,除去_____________,于分液漏斗中 静置片刻后,分出下层的_________液体。;（二）粗分离——透析: ①过程:取1 mL的_________溶液装入_______中,将其放入盛有 300 mL的物质的量浓度为20 mmol/L的___________中(pH为 7.0),透析12 h。 ②原理:透析袋能使_______自由进出,而将_______保留在袋 内。 ③目的:去除_____________________________。;（三）纯化（分三步）: 制作___________ 　 装填___________ ;a.制作凝胶色谱柱;;;;;;;;3.通过颜色变化鉴定有机化合物、细胞器、微生物等的方法总结;鉴定物;操作提示 (1)以