蛋白质相互作用技术研究的几种技术.ppt

蛋白质相互作用研究技术 ;酵母双杂交 谷胱苷肽-S-转移酶沉淀试验(GST-pull down） 免疫共沉淀 双分子荧光互补技术(BIFC) 生物发光共振能量转移（ＢＲＥＴ）技术;一、细菌双杂交系统; 酵母激活因子 GAL4：N端：147个氨基酸组成的DNA结合域(BD)， C端：113个氨基酸组成的转录激活域(AD)。GAL4分子的DNA结合域可以和上游激活序列(upstream activating sequence，UAS)结合，而转录激活域则能激活UAS下游的基因进行转录。 组成部分：（1）与BD融合的蛋白表达载体，被表达的蛋白称诱饵蛋白（bait）；（2）与AD融合的蛋白表达载体，被其表达的蛋白称靶蛋白（prey）；（3）带由一个或多个报告基因的宿主菌株。 ;5;BD;酵母双杂交基本过程;二、谷胱苷肽-S-转移酶沉淀试验(GST-pull down）原理;GST pull down实验流程;;三、免疫共沉淀原理;免疫共沉淀实验流程;四、双分子荧光互补技术( bimolecularfluorescence complementation , BIFC);14;BIFC的优势;五、生物发光共振能量转移（ＢＲＥＴ）技术;;蛋白质之间相互作用以及通过相互作用而形成的蛋白复合物是细胞各种基本功能的主要完成者。几乎所有的重要生命活动，包括DNA的复制与转录、蛋白质的合成与分