蛋白质一级结构测定.ppt

第三章蛋白质的一级结构的测定; ;蛋白质的一级结构的测定是一项非常复杂的工作;A. 样品必需纯（97%以上）； B. 知道蛋白质的分子量； C. 知道蛋白质由几个亚基组成； D. 测定蛋白质的氨基酸组成；并根据分子量计算每种氨基酸的个数。 E. 测定水解液中的氨量，计算酰胺的含量。;（2）蛋白质分子的一级结构测定方法;①测定蛋白质氨基酸残基组成;②测定蛋白质分子中多肽链的数目;由多条多肽链组成的蛋白质分子，必须先进行拆分单独分离出来； 几条多肽链通过二硫键交联在一 起。可在8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下，用过量的?-巯基乙醇处理，使二硫键还原为巯基； 用过氧酸氧化或巯基化合物还原二硫键断裂，用烷基化试剂保护生成的巯基，防止其重新被氧化； 如，血红蛋白为四聚体，烯醇化酶为二聚体；可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理，即可分开多肽链(亚基)。;;用酶溴化氢选择性降解多肽链产生的肽段用酸水解、碱水解（针对色氨酸分析）或酶水解后，用氨基酸自动分析仪测定； 测定并计算出蛋白质的氨基酸种类和数量；用Edman反应分析各肽段氨基酸顺序；;获得的各肽段的氨基酸顺序彼此间的交替重叠，拼凑出整条多肽链的氨基酸顺序；确定多肽链中二硫键的位置。;2、多肽链氨基酸顺序分析;;特点：专一性较强，水解速度快 断裂位点：赖氨酸或精氨酸残基的羧基参与形成的肽键 R1=Lys（赖、K