果糖-1,6-二磷酸酶Fructose1,6-bisphosphatase,FBP试剂盒说明书.pdfVIP

货号： MS3502 规格： 100 管/96 样 果糖 -1,6- 二磷酸酶 (Fructose 1,6-bisphosphatase ，FBP) 试剂盒说明书 微量法 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定 测定意义 果糖 -1,6- 二磷酸酶又称果糖 1,6- 二磷酸酯酶，催化 1,6- 二磷酸果糖和水生成 6- 磷酸果 糖和无机磷，在糖的异生代谢和光合作用同化物蔗糖的合成中起关键性的作用。 测定原理 FBP催化 1,6- 二磷酸果糖和水生成 6- 磷酸果糖和无机磷，在反应体系中添加的磷酸葡萄 糖异构酶 6- 磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成 6- 磷酸葡萄糖酸和 NADPH，340nm下测定 NADPH增 加速率，即可计算 FBP活性。 需自备的仪器和用品 分光光度计 / 酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿 /96 孔 板、研钵、冰和蒸馏水。 试剂的组成和配制 提取液： 100mL×1 瓶， 4℃保存； 试剂一：粉剂× 1 瓶， -20 ℃保存；临用前加入 20mL试剂四充分溶解待用，用不完的试剂 4 ℃保存； 试剂二：液体× 1 支，4℃保存；临用前加入 1mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂 4 ℃ 保存； 试剂三：粉剂× 1 支，-20 ℃保存；临用前加入 1mL蒸馏水充分溶解待用， 用不完的试剂 4 ℃ 保存； 试剂四：液体 25mL×1 瓶，4 ℃保存； 样本的前处理 4 1、细菌或培养细胞： 先收集细菌或细胞到离心管内， 离心后弃上清； 按照细菌或细胞数量 （10 个）：提取液体积（ mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL提取液）， 超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20 ％或 200W，超声 3s ，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 2、组织：按照组织质量（ g）：提取液体积 (mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加 入 1mL提取液），进行冰浴匀浆。 8000g 4 ℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 测定步骤 1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。 2、将试剂一、二、三 37 ℃( 哺乳动物 ) 或 25 ℃( 其它物种 ) 预热 10 分钟。 3、加样表： 试剂名称（μ L） 测定管 样本 20 试剂二 10 试剂三 10 试剂一 160 将上述试剂按顺序加入微量石英比色皿或 96 孔板中，立即混匀，加入最后一个试剂的同时开 始计时，在 340nm 波长下记录反应