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实验十 血糖的测定 实验十 血糖的测定 实验十 血糖的测定 血液中的葡萄糖称血糖。正常人血糖浓度较恒定，维持在3．9mmol ／L ～6．1mmol ／L 之间。血糖浓度的相对恒定是机体进行正常生理活动的前提条件之一，有着双重实际意义：其一，维持稳定的能源供给，满足机体在各种生理状态下对能量的需求。其二，保证机体不因进食致血糖浓度过高，导致糖的丢失。 因此，血糖的测定是临床生化检验实验室的常规检测项目。血糖测定按其发展过程及反应原理的不同，大致分三类：氧化还原法 ，缩合法（主要有邻甲苯胺法），酶法（主要有己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法）。下边介绍两种方法供选择。 一、葡萄糖氧化酶法 1. 了解葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，能进行血糖测定的操作。 2. 掌握血糖测定的临床意义。 【原理】 葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase，GOD) 能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。后者在过氧化物酶 (peroxidase，POD) 作用下，分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物，即 Trinder 反应。其颜色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在505nm 波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。反应式如下： 葡萄糖+O 2+2H 2O 2H 2O 2 2H 2O 2+4-氨基安替比林+酚 红色醌类化合物 试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计 【试剂】 1. 0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0） 称取无水磷酸氢二钠8.67g 及无水磷酸二氢钾5.3g 溶于800ml 蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠（或1mol/L盐酸）调节pH 至7.0，然后用蒸馏水稀释至1L 。 2. 酶试剂 称取过氧化物酶1200U ，葡萄糖氧化酶1200U ，4-氨基安替比林10mg ，叠氮钠100mg ，溶于上述磷酸盐缓冲液80ml 中，用1mol/L NaOH调pH 至7.0，加磷酸缓冲液至100ml 。 置冰箱保存，4℃可稳定3个月。 3. 酚溶液 称取重蒸馏酚100mg 溶于100ml 蒸馏水中（酚在空气中易氧化成红色，可先配成500g/L的溶液，贮存于棕色瓶中，用时稀释），用棕色瓶贮存。 4. 酶酚混合试剂 取上述酶试剂与酚溶液等量混合，4℃可以存放一个月。 5. 12mmol/L苯甲酸溶液 溶解苯甲酸1.4g 于蒸馏水约800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水至1L 。 6．葡萄糖标准贮存液（100mmol/L） 称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g ，溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml 中，并移入100ml 容量瓶内，再以12mmol/L苯甲酸溶液加至100ml 。 7. 葡萄糖标准应用液（5mmol/L） 吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml 于100ml 容量瓶中，加12mmol/L 苯甲酸溶液至刻度。 【操作】 取3 支试管, 编号，按下表操作。 表3-12 血糖测定操作步骤 加入物 (ml) 血清 葡萄糖标准液 蒸馏水 酶酚混合液 混匀，置 37 ℃水浴中保温 15分钟，在波长 505nm 处比色，以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度。 血糖（mmol/L）×5 标准管吸光度 空白管 － － 0.02 3.0 标准管 － 0.02 － 3.0 测定管 0.02 － － 3.0 血清葡萄糖（mmol/L)＝ 标准管吸光度测定管吸光度 1．测定结果如超过20mmol ／L ，应将标本用生理盐水稀释后再测定，结果乘以稀释倍数。 2．若酶酚混合试剂呈红色，应弃之重配。因标本和标准用量少，其加量是否准确对测定结果影响较大，故其加量必须准确。 3．GOD-POD 法的第一步反应特异性高，而由POD 催化的第二步指示反应是非特异性的，易受标本中尿酸、维生素C 、谷胱甘肽、胆红素等还原物的干扰，这些物质与色素原竞争H 202，使测定结果偏低。 4．Trinder 反应由Trinder 于1969年提出。后经许多学者改进，采用2，4-二氯酚、2-羟-3，5-二氯苯磺酸等代替苯酚，由于这些化合物氧化生成的色素的摩尔吸光系数均高于苯酚，使反应灵敏度得以提高。 【正常参考范围】 3.9～6.1mmol/L 【临床意义】 1. 生理性高血糖 可见于摄入高糖饮食或注射葡萄糖后，或精神紧张、交感神经兴奋，肾上腺分泌增加时。 2. 病理性高血糖 ⑴糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖