分子克隆技术第一部分优秀课件.pptVIP

电泳指示剂：核酸电泳常用的指示剂有两种，溴酚蓝（bromophenol blue, Bb）呈蓝紫色；二甲苯晴（xylene cyanol, Xc）呈蓝色，它携带的电荷量比溴酚蓝少，在凝胶中的的迁移率比溴酚蓝慢。 1. 含甘油或蔗糖，利于DNA样品沉入点样孔中 2. 含有电泳指示剂，以指示电泳的进程 上样缓冲液： 第三十一页，共87页 EB：溴化乙锭，可嵌入DNA分子中，受紫外光激发而发出荧光，利用它可检测DNA。是诱变剂，可引起插入突变，并有中度毒性，操作时应注意防护。操作时应戴手套，尽量减少台面污染。1000×贮存液(0.5mg/mL )，使用时按1：1000稀释配制染色液。 第三十二页，共87页 质粒电泳检测： 一般有一至三条带（质粒DNA的三种构型） 超螺旋 线型 开环 第三十三页，共87页 质粒电泳检测 第三十四页，共87页 本科生试验图片 第三十五页，共87页 质粒载体的抽提，外源DNA的准备 琼脂糖凝胶电泳检测DNA的质量 亚克隆载体与外源DNA的限制性内切酶消化 (目的片段的回收，亚克隆载体的去磷酸化) 载体与外源DNA的连接 感受态细胞的制备 连接子转化感受态细胞 重组子的转化及筛选、鉴定 利用质粒克隆外源DNA片段的主要步骤 第三十六页，共87页 外源DNA 克隆的要求 特点 不同的突出端 用两种限制酶消化后需纯化质粒以提高连接效率 一般酶切位点可保留,