化学发光法检测传染病.pptVIP

3、包涵体抗原，抗原性弱 4、缺乏构像表位 5、原核表达分子量小，抗原表位有限 6、抗原非糖基化，稳定性差 7、信号放大能力有限 8、固相载体形成的空间位阻 问题形成的技术原因---阳性标本的漏检 第三十一页，共45页 威高新型丙肝化学发光试剂的关键技术 1、包被和标记实现双特异，以降低假阳性率，并提高分析敏感度。 2、通过整体系统优化，进一步扩大阴阳反差，使结果判读泾渭分明。 第三十二页，共45页 威高新型丙肝化学发光试剂技术策略---灰区的解决 1、酵母真核表达抗原，高效减少灰区标本 eg: E.coli与Pichia pastoris 检测国标 国标品 表达载体 N2 N4 N24 P1 P5 P21 大肠杆菌 （原核表达） 0.260 0.149 0.235 0.742 2.659 0.706 毕赫酵母 （真核表达） 0.060 0.014 0.017 1.736 2.833 1.619 第三十三页，共45页 Anti HCV重组 NS3 抗原 NS3 HCV病毒的最重要的抗原 通过酵母真核系统成功的表达NS3抗原, 多重折叠以达到高度的免疫活性 高纯度; 易于直接标记 第三十四页，共45页 2、针对Fab端的单特异性抗体标记物一般二抗和单特异抗体的对比 国标 二抗类型 P27 L3 N2 N4 N18 N24 L4 一般单抗 0.560 0.160 0.230 0.162 0.071 0.214 0.065 单特异抗体 0.892 0.321 0.065 0.043 0.014 0.102 0.009 第三十五页，共45页 3、板式固相载体升级为管式磁微粒子包被 ★ 包被量更富足 ★ 管式液相反应更充分 ★ 更有效的解决空间位阻效应 第三十六页，共45页 4、光信号检测，提高信噪比 信号放大代替靶标放大，减少靶标放大带来的非特异性反应，远远大于ELISA的信噪比。 第三十七页，共45页 新型丙肝化学发光试剂---降低漏检率 1、在CORE、NS3、NS4、NS5的基础上增加了E1区，保证抗原片段的齐全 2、pichia pastoris表达系统带来以下优势 （1）非包涵体而可溶性表达，抗原性强 （2）因糖基化而提高稳定性 （3）分子量大，抗原表位丰富 （4）具有构像抗原表位，而提高检出率 3、磁微粒子标记抗原增加抗原抗体的反应强度 第三十八页，共45页 新型丙肝化学发光试剂检测国家参考品符合率对比 方法学 阳性符合率 阴性符合率 最低减出限 ELISA 30/30 29/30 3/4 CLIA 30/30 30/30 3/4 第三十九页，共45页 第一页，共45页 放免 酶联免疫 化学发光 荧光免疫 60年代 70年代 80年代 90年代 免疫标记技术发展 国产 进口 酶促化学发光 直接化学发光 第二页，共45页 化学发光技术的优势与应用前景 .敏感度高，(10-21mol/L)超过酶免，荧光免疫等方法 .精密度，准确度超过放免，酶免，荧光免疫等方法 .试剂稳定，无放射性，污染或生物毒性； .测定耗时短，方便快速提供结果报告； .测定项目齐全； 已发展成全自动的测定系统。 第三页，共45页 包被微粒子 包被磁珠 包被微孔 包被试管 包被技术的发展---磁微粒子 第四页，共45页 包被磁微粒 标记异鲁米诺 Eg:双抗夹心法分析模式 磁微粒子上包被的抗体与待检测抗原及异鲁米诺标记抗体结合 提升检测功能灵敏度 增加检测线性范围 比吖啶酯更稳定 延长试剂效期 第五页，共45页 * * * * * * * * * * Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y * Y Y Y Y Y Y Y Y 微粒包被 液相反应 第六页，共45页 磁微粒、直接化学发光反应 反应充分 速度更快 酶标板，板式 磁微粒，纳米级，均相 第七页，共45页 CLIA 板式载量 Y Y Y Y Y Y Y Y Y 磁微粒子 直接化学法 Ag/Ab 酶标板 发光板 Ag/Ab 微粒子化学发光法抗体载量优势 第八页，共45页 分配样品, 磁颗粒 和试剂 孵育 使反应物 结合 在磁场中 清洗去除 未