不同类型疫苗的作用机制 (2).ppt

* Morgan证实：用A12-32二聚体多次接种猪，猪也可产生高水平的中和抗体，可以保护猪免受强毒的攻击，但是该技术不适合O型FMDV。目前，已经发现FMDV结构基因和非结构基因2A、3C串联起来表达，可以产生76S的类病毒粒子，提纯该病毒粒子，用来免疫动物，其免疫效果类似于全病毒，可产生高水平的中和抗体，能抵抗强毒的攻击，并彻底解决了FMDV常规疫苗散毒的危险。除此以外，酵母和杆状病毒系统也用来表达VP1蛋白，解决VP1蛋白在原核表达系统中不被修饰加工等问题，以期提高其免疫原性。 第二十六页，共57页 * 其优点：①安全性高；②纯度高，稳定性好；③产量高；④用于病原体难于培养或有潜在致癌性，或有免疫病理作用的疫苗研究。 其缺点：与传统亚单位疫苗相比，免疫效果较差。 增强其免疫原性的方法： ①调整基因组合使之表达成颗粒性结构。 ②是在体外加以聚团化，包入脂质体或胶囊微球。 ③加入有免疫增强作用的化合物作为佐剂（adjuvant）。 第二十七页，共57页 * 用于亚单位疫苗生产的表达系统主要有大肠埃希氏菌、枯草杆菌、酵母、昆虫细胞、哺乳类细胞、转基因植物、转基因动物。比较成功的基因工程亚单位疫苗是乙型肝炎表面抗原疫苗。 第二十八页，共57页 * 3.2 基因工程活载体疫苗 基本概念： 活载体疫苗(Live recombinant vaccine)可以是非致病性微生物通过基因工程的方法使之表达某种特定病原物的抗原决定簇基因,产生免疫原性,也可以是致病性微生物通过基因工程的方法修饰或去掉毒性基因,但仍保持免疫原性。在这种疫苗中,抗原决定簇的构象与致病性病原体抗原的构象相同或者非常相似,活载体疫苗克服了常规疫苗的缺点,兼有死疫苗和活疫苗的优点,在免疫效力上很有优势,主要有基因突变疫苗和复制性活载体疫苗。 已报道的活病毒载体研究包括痘病毒、腺病毒、疱疹病毒、腺联病毒、反转录病毒、甲病毒、脊髓灰质炎病毒和门戈病毒、登革热病毒、流感病毒、水疱性口炎病毒。 第二十九页，共57页 * 作用机制： 痘病毒载体疫苗： NYVAC株痘病毒是来自哥本哈根疫苗株的高毒致弱毒，不能够在多数人类细胞系中增值，在动物体内也表现出高度致弱的特征。ALVAC株是来自金丝雀的疫苗株痘病毒，广泛用作都病毒载体，只限于在禽类中复制，而不能在哺乳动物体内和细胞中增殖。这俩株非复制型痘病毒载体都能用于表达外源基因，刺激机体产生保护性的免疫反应。 第三十页，共57页 * 腺病毒载体疫苗： 重组腺病毒载体的构建相对容易，重组腺病毒可以达到很高的滴度，可以通过肌肉、鼻腔或口服进行免疫，可以感染很多类型的分裂或静止期细胞，进入细胞的效率很高。通过基因工程的方法可以构建3种类型的重组腺病毒：一种是可以复制的重组腺病毒；二是不需要辅助病毒的复制缺陷型的重组腺病毒，需要有特定的包装细胞系；三是需要辅助病毒的复制缺陷型的重组腺病毒。缺失E1/E3区的复制缺陷型的重组腺病毒可以插入约7.5kb的外源基因片段；外源基因插入E3和E4缺失区可以产生可复制的重组腺病毒,插入的外源基因可达5-6kb。 第三十一页，共57页 * 在增殖E1缺失的重组体的时候存在一个问题，是容易通过重组产生一定比例的可复制的腺病毒，现在已经研制出一种包装细胞可以解决这一问题。尽管可复制腺病毒疫苗应用已经有许多年了，但已经发现了Ad4弱毒在人群中水平传播的例子。不需要辅助病毒的复制缺陷型重组腺病毒在应用中可能更安全，但复制缺陷型的重组腺病毒的免疫效果却没有可复制的重组腺病毒好，表达伪狂犬病毒gD糖蛋白的复制缺陷型重组腺病毒的保护剂量至少是可复制型重组腺病毒的250倍。 第三十二页，共57页 * 活载体疫苗的优点：可以将外源抗原基因有效地导入机体，而不需要动用原始活毒，因而相对安全；而且，不同的抗原可以使用一种载体传递系统，一次性免疫就可以达到保护机体抵抗几种疾病[2]。 活载体疫苗的缺点：宿主会产生强大的针对病毒载体的免疫反应，如果机体已经存在对病毒载体的免疫力，那么初次免疫会受到影响，再次免疫会激起机体强大的排斥反应。 第三十三页，共57页 * 3.3 DNA疫苗 基本概念： 基因疫苗（gene vaccine),也称DNA疫苗、核酸疫苗，即将编码外源性抗原的基因插入到含真核表达系统的质粒上，然后将质粒直接导入人或动物体内，让其在宿主细胞中表达抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答。 第三十四页，共57页 * DNA疫苗的作用机理 DNA疫苗能像病毒的活疫苗一样，进入宿主细胞的细胞核中转录为信使RNA，再在细胞浆中翻译成蛋白质。其中一部分蛋白质在降解后与MHC的Ⅰ类分子结合；而另一部分蛋白质也可以分泌出去，再像外源蛋白质一样被APC摄取后，在吞噬溶酶体中降解成的多肽