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大肠杆菌快速检测的电化学传感技术及仪器研究
【摘要】:水和食品中细菌的检测,特别是致病性细菌的检测,对于
控制传染病、保护环境卫生和人民群众身体健康都有着重要的意义。
大肠杆菌是人及各种动物肠道中的常居菌, 常随粪便从人及动物体内
排出,广泛散播于自然界。 大部分大肠杆菌没有致病性,但是部分能
产生肠毒素,导致人体肠胃炎等疾病。特别是 O157 型的大肠杆菌会
引起腹泻、 出血性大肠炎和溶血尿毒症等疾病。 当他入侵到肠道外的
其他组织器官时,会引起尿道炎、膀胱炎、阑尾炎等,对于免疫力下
降的病人还可引起败血症。 在卫生质量的评价和控制中, 通常采用大
肠杆菌作为指示菌, 利用对指示菌的检测和控制来了解水体或食品等
的受污染状况,从而评价其质量以保证卫生安全。因此,建立快速检
测大肠杆菌的新方法成为环境监测和食品卫生领域专家的一个巨大
挑战。 电化学/生物传感器是近二、 三十年来发展较快的电分析化学
测试和检测技术,具有快速、准确、灵敏等优点。其所测的信号通常
是电位、电流、电阻等的变化,可以直接测量,便于仪器自动化、小
型化和智能化。此外,将纳米材料应用于电化学/生物传感器的制备,
可以增大传感器电流响应,降低检测限,提高灵敏度,为电化学/生
物传感器提供了无穷的发展空间。 针对细菌的生物学特性, 电化学/
生物传感已广泛被应用于食品及环境中各种病菌中的快速检测, 具有
极大的应用前景。 本论文是导师金利通教授领导的世博会专项和华东
师范大学优秀博士生基金项目的部分工作内容。 论文基于纳米材料构
筑了多种性能稳定、 灵敏度高的电化学/生物传感器, 并把传感器应
用于大肠杆菌的快速检测, 为水体和食品中大肠杆菌的快速检测提供
了新方法,还以这些电化学/生物传感器为基础开发研制了电化学细
菌快速分析仪。本论文内容共分为五部分:Ⅰ.绪论 (第一章 )本部分
内容简要介绍大肠杆菌的环境卫生学意义、生物学特性以及致病性,
对当前大肠杆菌检测的研究现状与进展做了较为详细的概括, 同时对
电化学/生物传感器的工作原理及其在大肠杆菌检测中的应用进行
详细的介绍与综述。 Ⅱ.纳米修饰电极快速电化学检测大肠杆菌的研
究 (第二、三章 )大肠杆菌在含有诱导剂异丙基硫代 - β-D- 半乳糖苷
(IPTG) 的培养液中培养,能够产生 β-D- 半乳糖苷酶 ( β-gal) ;在膜渗透
剂的作用下, β-gal 从细胞体内释放到溶液中并催化底物对氨基酚
- β-D- 半乳糖苷 (PAPG)水解产生对氨基酚 (PAP),根据 PAP 在修饰电极
上的响应电流可以确定大肠杆菌的浓度。 第二章制备铂纳米颗粒修饰
电极(PtNP /GCE),并应用于 β-gal 活性的检测,实现了对大肠杆菌
的快速检测。 实验中考察了工作电位、 底物浓度以及膜渗透剂等条件
对检测结果的影响。 PtNP /GCE 提高了 PAP 的检测灵敏度,从而提
高大肠杆菌的检测灵敏度,并且缩短了分析时间。与传统方法相比,
能更好地满足食品安全、 公共卫生和临床医学等领域中快速检测的要
求。第三章制备了多壁碳纳米管 (MWNTs) /Nafion 复合膜修饰玻碳
电极,并对大肠杆菌进行快速安培检测。由于 Nafion 的阳离子交换
能力和 MWNTs 的电催化能力, MWNTs /Naf
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