组织化学技术酶组化与“活性”有关的文档.pptx

组织(Zhi)化学技术酶组化第一页，共三十二页。※ 特点： ① 在原位检测 ② 检测酶的活性而不是(Shi)酶分子本身酶的分类：按生物化学分类——六大类 ① 氧化还原酶 ② 转移酶 ③水解酶 ④ 裂解酶 ⑤异构酶 ⑥连接酶常用检测方法1．沉淀法 ①金属沉淀法：Ca++—Co++法；Pb法 ②偶联法：重氮盐法 ③ 靛原法 ④四唑盐法1第二页，共三十二页。2．后偶联法Post-coupling（ACP）3．合成法4．底物膜法 设计半透膜 切片/ 孵育法 ★★★ 影响酶组化实验的关键因素① 酶活性的保存a）固定：酶组化的固定剂有教严格的限制，不 同的酶适用不同的固定剂 △ 抑制酶活性和细胞化学成分(Fen)活性的重金 属盐Hg、Cr、Pb等不能用做固定剂。 △慎用醛 2第三页，共三十二页。b）取材：快捷，实验准备充分。冰结切片应先备液氮防止酶活性丧失。横冷箱切片稍固定（丙酮∶氯仿=1∶1）4℃，5～10分钟，但脂溶性蛋白脱落。② 底物浓度 A）量要足够1∶20V/ V B）孵育法只能用一次，配制 时要适量（节俭）③PH和渗透压 应以缓冲液调节④ 温度控制与时间(Jian)：室温37℃（40min） 4℃（5～10min）