目的基因筛选与dna文库构建.pptxVIP

目的基因筛选与DNA文库构建目的基因的获得准备要分离、改造、扩增或表达的基因 基因文库（gene library）；从物种的基因组或cDNA中PCR 扩增； 人工合成基因。 基因文库（Gene library）： 由大量的含有基因组DNA（即某一生物的全部DNA序列）的不同DNA片段的克隆所构成的群体, 称之为基因文库。 一个完全的基因文库，应该能够保证从中筛选到目的基因。 即 Genomic library按照外源DNA的片段：基因组 DNA 文库和cDNA文库 基因组 DNA 文库： 指将某生物体的全部基因组 DNA 用限制性内切酶或机械力量切割成一定长度范围的 DNA 片段，与合适的载体体外重组并转化相应的宿主细胞获得的所有阳性菌落。 包含基因的全部信息，如编码区，非编码区，内含子和外显子、启动子及调控序列cDNA文库: complementary DNA 互补DNA 由某一生物的特定器官或特定发育时期细胞内的mRNA经反转录形成的cDNA，它们所构成的重组DNA克隆群体，则称之为cDNA基因文库。 反映了基因表达普，对研究基因表达，调控及基因互作非常有用。基因组 DNA 文库的构建程序：1、载体的制备；2、高纯度大分子量基因组 DNA （High molecular weight DNA, HMW DNA）的提取；3、HMW DNA 的部分酶切与脉冲电泳分级分离（PFGE