用血红蛋白的提取与分离.pptxVIP

会计学;(一)蛋白质分离和提取的原理; 高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质的何种作用，作用结果是什么被破坏？;（二）蛋白质提取和分离的方法;1.凝胶色谱法; 3.凝胶色谱法的原理—分子筛效应;;2.电泳;3)类型:;讨论：如何测定蛋白质的分子量？;血液;(三)缓冲溶液;二.实验操作; 二、实验操作;1.洗涤红细胞;1.洗涤红细胞;2.释放血红蛋白;3.分离血红蛋白;(3)分离血红蛋白溶液：;2、血红蛋白的粗分离----透析：;透析过程动画演示;纯化——凝胶色谱法;纯度鉴定 ;观察你处理的血液样品离心后是否分层（见教科书图5-18），如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。;由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。此外，还可以加入大分子的有色物质，例如蓝色葡聚糖—2000或红色葡聚糖，观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。 ;如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的