感受态细胞和质粒DNA的转化(C).ppt

感受态细胞和质粒DNA的转化;导入大肠杆菌: 氯化钙转化法 electroporation 电击法又叫电穿孔法 体外包装感染法 重组DNA导入哺乳动物细胞: DNA- 磷酸钙共沉淀、 DEAE-葡聚糖转染法 脂质体介导法、 原生质体融合法 酵母菌转化法: 完整细胞转化法 原生质体转化法 电击法 ;大肠杆菌(Escherichia coli);4; 大肠杆菌的不同菌株的保存期差别较大。有些菌株在液体培养基中，4℃可保存几个月，而有些菌株在相同条件下只能保存几天。如在相同条件下，大肠杆菌K12株比大肠杆菌X1776株保存期长。 所以菌株首先应划平板分离单个菌落，经扩增后再做抗药性等鉴定，然后应用或保存。保存一般用对数生长后期的细菌。根据不同需要做短期、中期或长期保存。; ① LB琼脂平板划线，37℃，倒置平板培养(16-24hr)，形成单一菌落后，用石腊纸(parafilm)将平皿四周封严(使平皿隔绝空气)，倒置放入4℃或-20℃冰箱中，可保存数周。 E. coli菌株的生存期差别大：有些菌株在液体培养基中，4℃能存活几个月。有些菌株只能活几天。 ② 穿刺琼脂(stab agar)，室温，避光可保存数年。 ③ 冰冻：单一菌落，液体培养基中扩增后，稀释后倒入10-50%甘油培养